Chapitre 3 : Matériels et méthodes
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c) Mesure d’absorbance : Méthode de LORENZEN
- Transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve spectrophotomètre.
- Mesurer les absorbance brutes des extraits non acidifier aux longueurs d’onde de 665 et 750
nm sois Ab
na
665 et Ab
na
750 .
- Acidifier par addition de 10 µl d HCl 0.3 mol/l par millilitre d’extrait (soit une goutes)
directement dans la cuve et attendre 2 à 3 min.
- Mesurer les absorbance brutes des extraits acidifié à 665 et 750 nm soit Ab
a
665 et Ab
a
750 .
2.3.5. Calcule et expression des résultats
Les absorbances brutes à 665 nm et les blanc de turbidité à 750 nm doivent être corrigés en
soustrayant les blanc de cuves, puis on obtient les absorbances nettes en soustrayant les
absorbances corrigées mesurées a 750 nm des absorbances corriges mesurées a 665 nm:
- Avant acidification
A
na
665 = (Ab
na
665 - bc 665 )-(Ab
na
750 - bc 750 )
- Après acidification
A
a
665 = (Ab
a
665 - bc 665 )-(Ab
a
750 - bc 750 )
Et donc
[Chlorophylle a](mg/m
3 ) = [26.7(A
na
665 - A
a
665 )*v]/(V*l)
Où:
- V : Volume d’eau filtrée (litres).
- v : Volume de solvant d’extraction (millilitres).
- l : Longueur du trajet optique de la cuve de mesure (centimètres).
2.4. L’analyse des sels nutritifs
Les réactifs, les solutions étalons, et les protocoles de dosage pour chaque élément nutritif
sont réalisés selon les protocoles décrits par (Aminot et al., 1983).
2.4.1. Dosage des nitrites NO 2
-
a) Principe de la méthode
La méthode décrite, fondée sur la réaction de Griess, et appliquée à l’eau de mer par
Bendschneider et Robinson (1952). Les ions nitrite forment un diazoïque avec la sulfanilamide
en milieu acide (pH < 2), puis le diazoïque réagit avec le N-Naphtyl-éthylènediamine pour
former le colorant rose absorbe a la longueur d’onde de 543 nm.