Troisième chapitre
Matériel et méthodes
22
Figure n°15 : Autoanalyseur « Skalar San
+
2.3 – Dosage des paramètres biologiques
».
2.3.1 - Dosage de la chlorophylle a et des phéopigments par
spectrophotométrie
Le dosage de la concentration en chlorophylle a d’une eau permet d’estimer l’importance de
la population phytoplanctonique qui peuple cette eau. La détermination quantitative globale
de la fraction particulaire vivante dans les milieux aquatiques est importante pour l’étude et la
compréhension de phénomènes écologiques. Pour cela une estimation des pigments
photosynthétique s’avère nécessaire, plus simple et plus rapide que des méthodes basées par
exemple sur le comptage des cellules (AMINOT et CHAUSSEPIED, 1983).
Mode opératoire
a) Filtration
L’eau doit être filtrée le plus rapidement possible après le prélèvement. Pour cela utiliser de
préférence les membranes de filtration en fibre de verre de type Whatman GF/C qui retiennent
les particules de taille supérieures à 0.5-1µm. Le protocole consiste à :
- Placer une membrane sur le support
- Appliquer le vide et filtrer l’échantillon en prenant soin de l’agiter pour bien récupérer
toutes les particules pour éviter le risque d’éclatement des cellules.
- Rincer le cas échéant la tulipe du support –filtre avec un peu d’eau fraîchement
filtrée pour assembler toutes les particules sur le filtre.
- Mettre le filtre dans le tube prévu à cet usage et si possible commencer l’extraction.
- Placer aussitôt le filtre ou l’extrait à l’abri de la lumière et au froid si l’analyse est
différée.
b) Extraction des pigments
Le filtre et l’extrait pigmentaire ne doivent jamais rester à la lumière, à cet effet il est bon
d’envelopper les tubes dans une feuille d’aluminium (fig. n°16). L’extraction consiste à :
Matériel et méthodes
22
Figure n°15 : Autoanalyseur « Skalar San
+
2.3 – Dosage des paramètres biologiques
».
2.3.1 - Dosage de la chlorophylle a et des phéopigments par
spectrophotométrie
Le dosage de la concentration en chlorophylle a d’une eau permet d’estimer l’importance de
la population phytoplanctonique qui peuple cette eau. La détermination quantitative globale
de la fraction particulaire vivante dans les milieux aquatiques est importante pour l’étude et la
compréhension de phénomènes écologiques. Pour cela une estimation des pigments
photosynthétique s’avère nécessaire, plus simple et plus rapide que des méthodes basées par
exemple sur le comptage des cellules (AMINOT et CHAUSSEPIED, 1983).
Mode opératoire
a) Filtration
L’eau doit être filtrée le plus rapidement possible après le prélèvement. Pour cela utiliser de
préférence les membranes de filtration en fibre de verre de type Whatman GF/C qui retiennent
les particules de taille supérieures à 0.5-1µm. Le protocole consiste à :
- Placer une membrane sur le support
- Appliquer le vide et filtrer l’échantillon en prenant soin de l’agiter pour bien récupérer
toutes les particules pour éviter le risque d’éclatement des cellules.
- Rincer le cas échéant la tulipe du support –filtre avec un peu d’eau fraîchement
filtrée pour assembler toutes les particules sur le filtre.
- Mettre le filtre dans le tube prévu à cet usage et si possible commencer l’extraction.
- Placer aussitôt le filtre ou l’extrait à l’abri de la lumière et au froid si l’analyse est
différée.
b) Extraction des pigments
Le filtre et l’extrait pigmentaire ne doivent jamais rester à la lumière, à cet effet il est bon
d’envelopper les tubes dans une feuille d’aluminium (fig. n°16). L’extraction consiste à :