Troisième chapitre
Matériel et méthodes
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Figure n°16 : Tube dans une feuille d’aluminium
- Introduire le filtre dans un tube et ajouter 10ml du solvant d’extraction (acétone 90%)
- Déchiqueter le filtre à l’aide d’une baguette ou d’un tube de verre à embout coupant,
boucher et agiter pour disperser les filtres ;
- Laisser l’extraction se poursuivre, soit une vingtaine d’heure au réfrigérateur dans
l’acétone à 90% :
- On utilise une centrifugeuse, allant jusqu’à 5000 tours par minute. Les tubes sont alors
mis à centrifuger pendant 15 minutes à 4000 tours par minute. On obtient ainsi un
surnageant limpide.
c) Mesure d’absorbance
- à une longueur d’onde mesurée : 665nm et 750nm.
d) Méthode de lorenzen (solvant : acétone a 90%)
- Transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve de spectrophotométrie.
- Mettre la cuve en place et s’assurer de son positionnement correct.
- Mesurer les absorbances brutes des extraits non acidifiés aux longueurs d’ondes de
665 et 750nm, Soit : Ab 665 etAb 750
-
- Mesurer les absorbances brutes des extraits acidifiés à 665nm et 750nm soit Ab
Acidifier par addition de 10µl d’acide chlorhydrique 0.3mol/l par millilitre d’extrait
directement dans la cuve et attendre 2 à 3 minutes.
665 a
et Ab 750 a
40,1( A
.
665 na - A 665 a
Chl.a(mg/m³) =
) x v
V x L