MATERIELS ET METHODES
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II.2.4. Caractérisation de la résistance aux antibiotiques (CTX ou IMP)
Dans cette partie, nous nous sommes intéressés à la caractérisation de la résistance
chez des bactéries isolées sur l’une des deux béta-lactamines très actives et plus au moins
utilisées en clinique à savoir le cefotaxime et l’imipénème.
II.2.4.1. Isolement et Identification bactérienne
Les souches ayant présentées une résistance à IMP ou au CTX, ont fait l’objet d’un
réisolement sur le Mueller Hinton supplémenté avec l’antibiotique approprié, afin de
confirmer leur résistance. Les bactéries isolées ont été conservées et identifiées par des
galeries API 20E (Biomérieux.).
Principe
La galerie API 20E est un système d’identification des entérobactéries et autres
bacilles à Gram négatif. Elle comporte 20 tests biochimiques standardisés et miniaturisés. Les
milieux déshydratés sont reconstitués avec une suspension bactérienne. Les réactions
produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou
révélés par l’addition de réactifs (Biomérieux).
Technique
Réunir fond et couvercle d’une boite d’incubation et répartir environ 5ml d’eau stérile
dans les alvéoles afin de créer une atmosphère humide,
Retirer la galerie stérile de son emballage et la déposer dans la boite d’incubation,
Préparer l’inoculum bactérien : mettre 1 à 3 colonies jeunes dans de l’eau
physiologique stérile,
Inoculer la galerie comme suit :
Remplir les tubes et cupules des tests (CIT, VP et GEL).
Remplir uniquement les tubes (et non les cupules) des autres tests.
Créer une anaérobiose dans les tests : ADH, LDC, ODC, H 2 S, URE, en
remplissant leur cupule d’huile de vaseline.
Incuber à 33°C pendant 24-48heures.
Le test d’oxydase est réalisé par le dépôt d’un inoculum bactérien sur le disque
d’oxydase. La présence du cytochrome oxydase se traduit par l’apparition d’une
coloration violette.
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II.2.4. Caractérisation de la résistance aux antibiotiques (CTX ou IMP)
Dans cette partie, nous nous sommes intéressés à la caractérisation de la résistance
chez des bactéries isolées sur l’une des deux béta-lactamines très actives et plus au moins
utilisées en clinique à savoir le cefotaxime et l’imipénème.
II.2.4.1. Isolement et Identification bactérienne
Les souches ayant présentées une résistance à IMP ou au CTX, ont fait l’objet d’un
réisolement sur le Mueller Hinton supplémenté avec l’antibiotique approprié, afin de
confirmer leur résistance. Les bactéries isolées ont été conservées et identifiées par des
galeries API 20E (Biomérieux.).
Principe
La galerie API 20E est un système d’identification des entérobactéries et autres
bacilles à Gram négatif. Elle comporte 20 tests biochimiques standardisés et miniaturisés. Les
milieux déshydratés sont reconstitués avec une suspension bactérienne. Les réactions
produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou
révélés par l’addition de réactifs (Biomérieux).
Technique
Réunir fond et couvercle d’une boite d’incubation et répartir environ 5ml d’eau stérile
dans les alvéoles afin de créer une atmosphère humide,
Retirer la galerie stérile de son emballage et la déposer dans la boite d’incubation,
Préparer l’inoculum bactérien : mettre 1 à 3 colonies jeunes dans de l’eau
physiologique stérile,
Inoculer la galerie comme suit :
Remplir les tubes et cupules des tests (CIT, VP et GEL).
Remplir uniquement les tubes (et non les cupules) des autres tests.
Créer une anaérobiose dans les tests : ADH, LDC, ODC, H 2 S, URE, en
remplissant leur cupule d’huile de vaseline.
Incuber à 33°C pendant 24-48heures.
Le test d’oxydase est réalisé par le dépôt d’un inoculum bactérien sur le disque
d’oxydase. La présence du cytochrome oxydase se traduit par l’apparition d’une
coloration violette.