MATERIELS ET METHODES
24
II.2.2.7. Analyse microbiologique par la méthode de filtration sur membrane (Rodier et
al., 1996)
La qualité microbiologique de l’eau prélevée a été déterminée en recherchant la flore
totale, les coliformes totaux et les coliformes thermotolérants. Cette méthode consiste en la
filtration de 100 ml d’échantillon ou de dilution sur une membrane en esters de cellulose, de
porosité 0,45 µm placée dans une rampe de filtration en inox de six postes. La membrane est
déposée sur la surface d’un milieu spécifique pour chaque recherche.
Technique :
Mettre en place le dispositif de filtration dans la zone stérile, tout en plaçant la
membrane sur la plaque poreuse de la rampe.
Agiter soigneusement le flacon d'eau à analyser et filtrer stérilement 100ml
d’échantillon.
Déposer la membrane à la surface d’une gélose de Mueller Hinton pour la flore totale
et à la surface d’une gélose au tergitol pour la recherche des coliformes totaux et
thermotolérants.
La recherche de la flore totale et des coliformes totaux s’effectue à 35°C pendant 2448h, alors que les coliformes thermotolérants ont été recherchés à une température de
44°C pendant 24-48h.
II.2.3. Prévalence de la résistance aux antibiotiques
L’évaluation de la résistance à trois molécules de béta-lactamines (AMX, CTX et
IMP) a été réalisée chez la flore totale et les coliformes totaux. Après filtration de 100ml
d’échantillon, les membranes ont été déposées sur le Mueller Hinton (flore totale) ou le
tergitol (coliformes) additionné de l’un des antibiotiques : AMX, CTX, IMP à des
concentrations de 32, 64 et 16µg/ml respectivement.
La prévalence de la résistance est déterminée pour la flore totale par le nombre de
bactéries résistantes obtenues sur Mueller Hinton rapporté au nombre de la flore totale
obtenue sur MH sans antibiotique. De même, la prévalence de la résistance chez les bactéries
coliformes a été déterminé par le nombre de coliformes résistants rapportés au nombre de
coliformes totaux retrouvés sur le milieu Tergitol.
24
II.2.2.7. Analyse microbiologique par la méthode de filtration sur membrane (Rodier et
al., 1996)
La qualité microbiologique de l’eau prélevée a été déterminée en recherchant la flore
totale, les coliformes totaux et les coliformes thermotolérants. Cette méthode consiste en la
filtration de 100 ml d’échantillon ou de dilution sur une membrane en esters de cellulose, de
porosité 0,45 µm placée dans une rampe de filtration en inox de six postes. La membrane est
déposée sur la surface d’un milieu spécifique pour chaque recherche.
Technique :
Mettre en place le dispositif de filtration dans la zone stérile, tout en plaçant la
membrane sur la plaque poreuse de la rampe.
Agiter soigneusement le flacon d'eau à analyser et filtrer stérilement 100ml
d’échantillon.
Déposer la membrane à la surface d’une gélose de Mueller Hinton pour la flore totale
et à la surface d’une gélose au tergitol pour la recherche des coliformes totaux et
thermotolérants.
La recherche de la flore totale et des coliformes totaux s’effectue à 35°C pendant 2448h, alors que les coliformes thermotolérants ont été recherchés à une température de
44°C pendant 24-48h.
II.2.3. Prévalence de la résistance aux antibiotiques
L’évaluation de la résistance à trois molécules de béta-lactamines (AMX, CTX et
IMP) a été réalisée chez la flore totale et les coliformes totaux. Après filtration de 100ml
d’échantillon, les membranes ont été déposées sur le Mueller Hinton (flore totale) ou le
tergitol (coliformes) additionné de l’un des antibiotiques : AMX, CTX, IMP à des
concentrations de 32, 64 et 16µg/ml respectivement.
La prévalence de la résistance est déterminée pour la flore totale par le nombre de
bactéries résistantes obtenues sur Mueller Hinton rapporté au nombre de la flore totale
obtenue sur MH sans antibiotique. De même, la prévalence de la résistance chez les bactéries
coliformes a été déterminé par le nombre de coliformes résistants rapportés au nombre de
coliformes totaux retrouvés sur le milieu Tergitol.