MATERIELS ET METHODES
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Lecture
Ces galeries doivent être lues selon les recommandations du fournisseur. Après
codification des réactions en un profil numérique, l’identification est obtenue on se référant à
un catalogue analytique (Biomérieux).
II.2.4.2. Diffusion en milieu gélosé : Antibiogramme
L’étude de la résistance de nos souches vis-à-vis de 25 antibiotiques a été réalisée par
la méthode de diffusion en milieu solide (Courvalin, 1985 ; CA-SFM, 2008).
Principe
Cette technique est basée sur l’observation de la croissance bactérienne en présence
d’un gradient de concentration d’antibiotiques, obtenu par diffusion à partir des disques
d’antibiotiques dans un milieu gélosé (Muller-Hinton). Ce gradient est inversement
proportionnel à la distance par rapport aux disques. La croissance s’arrête lorsque les
bactéries sont en contact avec leur concentration minimale d’inhibition dessinant des halos
d’inhibition autour du disque d’antibiotique.
Technique
A partir d’une culture jeune (18-24h), préparer dans 5ml d’eau physiologique une
suspension bactérienne de 0,5McFarland (10
8 cellules/ml).
Ajuster l’inoculum à 10
7 cellules/ml
Plonger un écouvillon stérile dans la suspension bactérienne de 10
7 cellules/ml par
une dilution au 1/10,
Ensemencer la boite en frottant l’écouvillon sur la totalité de la surface gélosée et
en tournant la boite trois fois de 60° afin d’assurer une bonne distribution de
l’inoculum,
Appliquer les disques d’antibiotiques (tableau en annexes) à l’aide d’un
distributeur stérile selon le schéma de la (fig 8),
Laisser diffuser pendant 15 minutes, à température ambiante,
Incuber à 35°C pendant 18-24.
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Lecture
Ces galeries doivent être lues selon les recommandations du fournisseur. Après
codification des réactions en un profil numérique, l’identification est obtenue on se référant à
un catalogue analytique (Biomérieux).
II.2.4.2. Diffusion en milieu gélosé : Antibiogramme
L’étude de la résistance de nos souches vis-à-vis de 25 antibiotiques a été réalisée par
la méthode de diffusion en milieu solide (Courvalin, 1985 ; CA-SFM, 2008).
Principe
Cette technique est basée sur l’observation de la croissance bactérienne en présence
d’un gradient de concentration d’antibiotiques, obtenu par diffusion à partir des disques
d’antibiotiques dans un milieu gélosé (Muller-Hinton). Ce gradient est inversement
proportionnel à la distance par rapport aux disques. La croissance s’arrête lorsque les
bactéries sont en contact avec leur concentration minimale d’inhibition dessinant des halos
d’inhibition autour du disque d’antibiotique.
Technique
A partir d’une culture jeune (18-24h), préparer dans 5ml d’eau physiologique une
suspension bactérienne de 0,5McFarland (10
8 cellules/ml).
Ajuster l’inoculum à 10
7 cellules/ml
Plonger un écouvillon stérile dans la suspension bactérienne de 10
7 cellules/ml par
une dilution au 1/10,
Ensemencer la boite en frottant l’écouvillon sur la totalité de la surface gélosée et
en tournant la boite trois fois de 60° afin d’assurer une bonne distribution de
l’inoculum,
Appliquer les disques d’antibiotiques (tableau en annexes) à l’aide d’un
distributeur stérile selon le schéma de la (fig 8),
Laisser diffuser pendant 15 minutes, à température ambiante,
Incuber à 35°C pendant 18-24.