Contribution à l’étude des variations des teneurs en phénols totaux
chez la Magnoliophyte marine Posidonia oceanica (L. ) Delile
Matériel et méthodes
19
d‟absorption, dont l‟intensité est proportionnelle à la quantité de phénols totaux présents
dans l‟échantillon (WATERMAN et MOLE, 1994).
A l‟obscurité, l‟échantillon à doser est dilué en tenant compte de la gamme mesurable du
spectrophotomètre (ex : 40 µl de l'extrait sont mélangés à 3960 µl d'eau bi-distillée). 1 ml de
l'échantillon dilué est mélangé dans un tube à essai avec 1 ml de réactif Folin-Ciocalteu à
1N (SIGMA@, 2N), puis mélangé au vortex. Après 3 mn d‟incubation à température
ambiante et pour rendre le milieu basique, 2 ml d‟une solution de carbonate de sodium
Na 2 CO 3 (SIGMA@, 20%) sont ajoutés, puis agités au vortex. Les échantillons sont incubés
à 20°C pendant 1 heure (incubateur de marque Nüve, EN : 400), puis centrifugés
(centrifugeuse de type SIGMA@ 1-6P) pendant 8 mn à 1600 tr/mn (Figure 7). Les dosages
sont effectués sur trois réplicats de chaque extrait et la moyenne est calculée avec les
mesures, dont la différence ne dépasse pas 10% (CUNY et al., 1994).
Les teneurs en composés phénoliques sont déterminées par colorimétrie à l'aide d'un
spectrophotomètre à UV-visible à double faisceau de marque SHIMADZU UV-1800. La
technique à double faisceau aide à éliminer l'absorbance du blanc et donne directement la
densité optique de l'échantillon.
Le phloroglucinol (Fluka) est utilisé pour l‟élaboration des courbes étalons (RAGAN et
CRAIGIE, 1978). Un blanc, ne contenant pas de composé à doser, est réalisé pour annuler
l'absorbance due aux réactifs eux-mêmes, il est considéré comme le point 0 de la gamme.
Pour déterminer la longueur d‟onde adéquate, un balayage est effectué en utilisant la
solution la plus concentrée de la gamme étalon. Le domaine du spectre choisi est délimité
entre la longueur d‟onde 640 et 800 ηm en fonction des valeurs relevées dans la littérature.
Deux pics sont enregistrés, l‟un à 645 ηm et l‟autre à 760 ηm. La mesure de l‟absorbance
des échantillons est basée sur le chromophore situé vers la plus grande longueur d‟onde, afin
de diminuer le risque de superposition des absorptions propres aux différents composés
(ROUESSAC et ROUESSAC, 2004). Les concentrations en composés phénoliques
présentent dans les échantillons sont exprimées en μg équivalent de phloroglucinol ml
-1 .
chez la Magnoliophyte marine Posidonia oceanica (L. ) Delile
Matériel et méthodes
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d‟absorption, dont l‟intensité est proportionnelle à la quantité de phénols totaux présents
dans l‟échantillon (WATERMAN et MOLE, 1994).
A l‟obscurité, l‟échantillon à doser est dilué en tenant compte de la gamme mesurable du
spectrophotomètre (ex : 40 µl de l'extrait sont mélangés à 3960 µl d'eau bi-distillée). 1 ml de
l'échantillon dilué est mélangé dans un tube à essai avec 1 ml de réactif Folin-Ciocalteu à
1N (SIGMA@, 2N), puis mélangé au vortex. Après 3 mn d‟incubation à température
ambiante et pour rendre le milieu basique, 2 ml d‟une solution de carbonate de sodium
Na 2 CO 3 (SIGMA@, 20%) sont ajoutés, puis agités au vortex. Les échantillons sont incubés
à 20°C pendant 1 heure (incubateur de marque Nüve, EN : 400), puis centrifugés
(centrifugeuse de type SIGMA@ 1-6P) pendant 8 mn à 1600 tr/mn (Figure 7). Les dosages
sont effectués sur trois réplicats de chaque extrait et la moyenne est calculée avec les
mesures, dont la différence ne dépasse pas 10% (CUNY et al., 1994).
Les teneurs en composés phénoliques sont déterminées par colorimétrie à l'aide d'un
spectrophotomètre à UV-visible à double faisceau de marque SHIMADZU UV-1800. La
technique à double faisceau aide à éliminer l'absorbance du blanc et donne directement la
densité optique de l'échantillon.
Le phloroglucinol (Fluka) est utilisé pour l‟élaboration des courbes étalons (RAGAN et
CRAIGIE, 1978). Un blanc, ne contenant pas de composé à doser, est réalisé pour annuler
l'absorbance due aux réactifs eux-mêmes, il est considéré comme le point 0 de la gamme.
Pour déterminer la longueur d‟onde adéquate, un balayage est effectué en utilisant la
solution la plus concentrée de la gamme étalon. Le domaine du spectre choisi est délimité
entre la longueur d‟onde 640 et 800 ηm en fonction des valeurs relevées dans la littérature.
Deux pics sont enregistrés, l‟un à 645 ηm et l‟autre à 760 ηm. La mesure de l‟absorbance
des échantillons est basée sur le chromophore situé vers la plus grande longueur d‟onde, afin
de diminuer le risque de superposition des absorptions propres aux différents composés
(ROUESSAC et ROUESSAC, 2004). Les concentrations en composés phénoliques
présentent dans les échantillons sont exprimées en μg équivalent de phloroglucinol ml
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