Contribution à l’étude des variations des teneurs en phénols totaux
chez la Magnoliophyte marine Posidonia oceanica (L. ) Delile
Matériel et méthodes
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Figure 6 : Synopsis du protocole utilisé pour l‟extraction des composés phénoliques (CUNY et al.,
1995).
3.4.3. Dosage des composés phénoliques totaux
Le protocole utilisé est celui mis au point par WATERMAN et MOLE (1994) et modifié par
KOIVIKKO et al. (2005). Le principe du dosage est basé sur l‟emploi du réactif de FolinCiocalteu, décrit dès 1965 par SINGLETON et ROSSI. Depuis, son utilisation s‟est
largement répandue pour caractériser les extraits végétaux d‟origines diverses. Ce réactif est
un acide de couleur jaune constitué d‟un mélange d'acide phosphotungstique et d'acide
phosphomolybdique auquel a été additionné du sulfate de lithium, qui élimine le problème
de précipitation. En milieu basique, il oxyde les groupements oxydables des composés
polyphénoliques présents dans l‟échantillon. Le produit de la réduction, nommé
chromophore, est un oxyde métallique de couleur bleue, présentant un maximum
 Déshydratation sous jet d‟azote.
 Récupération du résidu sec dans 1 ml de méthanol.
 Séchage de la phase organique (ajout du sulfate de sodium anhydre Na 2 SO 4 )
 Filtration de la phase organique sur filtre Whatman.
 Centrifugation de la phase organique
(2000 tr/mn pendant 10 mn).
 Extraction des composés phénoliques à l‟acétate d’éthyle (25 ml) en ampoule à décanter.
 Récupération de la phase organique (phase supérieure).
 La phase inférieure est re-extraite à l‟acétate d’éthyle (25 ml) en ampoule à décanter,
récupération de la phase organique qui est ajoutée à la première.
 Evaporation de l‟éthanol sous vide
au rotavapor (bain-marie 45°C).
 Filtration de l‟infusion sur filtre Whatman.
 Acidification de l‟extrait par quelques gouttes de HCL (2N)
 Infusion à reflux de 3 g d‟échantillon au bain-marie (40°C), à l‟obscurité dans
200 ml d‟éthanol aqueux (50% v/v) pendant 3 h.