Chapitre II
Matériel et méthodes
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Evaluation du nombre des CF :
- Retenir les boites de deux dilutions successives donnant une numération comprise entre 15
et 150 colonies.
- Prendre de chaque boite au minimum 3 colonies jaunes suspectes
- Faire le test de l’urée indole
 Première lecture de la première dilution retenue:
b : nombre de colonies repiquées qui sont indole + et urée –
A : nombre de colonies repiquées (minimum 3)
C : nombre total de colonies par boite retenue
 Première lecture de la deuxième dilution retenue:
Le nombre de coliformes fécaux dont E.coli est donné par la formule suivante :
d : dilution de la première boite retenue pour a1
b) Recherche et dénombrement des streptocoques fécaux
 Etalement en surface
- Transférer à l’aide d’une pipette stérile, 2 gouttes de chaque dilution sur des boites de Pétri
contenants le milieu Slanetz et Bartley;
- Etaler soigneusement l’inoculum le plus rapidement possible à la surface de la gélose à
l’aide d’un râteau stérile pour chaque boite ;
- Incuber les boites couvercle en bas à 37°C pendant 24-48 heures.
 Lecture
Au bout de 24 à 48 h, les colonies apparaîtront comme dans le cas de l’analyse de l’eau, c'est-à-dire
rouges-marrons, un isolement donc sera nécessaire sur milieu BEA, pour confirmer s’il s’agit de
streptocoques fécaux. Une coloration de Gram, un test de la catalase et une identification
biochimique à l’aide de galerie API 20 STREP
c) Recherche et dénombrement des staphylocoques
On procède de la même manière que précédemment en utilisant un milieu gélosé Baird Parker,
après incuber à 37°C pendant 24 -48heures. Les colonies apparaitront noires.
d) Recherche et dénombrement des anaérobies sulfitoréducteurs (ASR)
 Mode opératoire
- Prélever 1ml, à l’aide d’une pipette stérile, de chaque dilution dans un tube à essai vide ;
- Mettre les échantillons dans un bain marie à 80°C pendant 10 minutes pour éliminer toutes
les formes végétatives;
- Refroidir immédiatement sous l'eau de robinet;
a 1+ a 2
CF( E.coli) = ——————
1,1 . d
b
a 1 = —————— . C
A
b
a 2 = —————— . C
A