Chapitre II
Matériel et méthodes
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e) Dénombrement des Staphylocoques
Parmi les staphylocoques, c’est le S.aureus qui est dénombré sur milieu Chapman.
Les colonies jaunes dorées suspectes sont dénombrées et ont fait l’objet d’une identification
biochimique (Figure14).
II.3.3.1.2. Dénombrement des germes sulfitoréducteurs
Ces indicateurs de contamination fécale ancienne sont dénombrés sur gélose viande foie.
Quelques bactéries anaérobies sulfito-réductrices ont été isolées et identifiées (Figure15).
II.3.3.1.3. La recherche des Salmonelles et les Vibrions
a) Recherche des salmonelles
Pour la recherche des salmonelles deux enrichissements successifs sur milieu SFB additionné
de disques SFB ont été effectués. L’isolement est réalisé sur milieu SS (gélosé salmonellesShigelles). Les colonies suspectes (couleur rose ou rose à centre noir bien noire) ont fait l’objet
d’une identification (coloration de Gram, test de la catalase, test de l’oxydase et tests biochimiques
à l’aide de la galerie API 20 E), (Figures 16 et 17).
b) Recherche des vibrions
L’enrichissement des vibrions est effectué sur milieu Eau Peptonée Alcaline (EPA) 10 fois
concentrée et l’isolement est réalisé sur gélose TCBS (Thiosulfate-Citrate-Bile-Saccharose).
Les colonies présumées vibrions ont été identifiées (coloration de Gram, test de la catalase,
test de l’oxydase et tests biochimiques à l’aide de la galerie API 20 E), (Figure 18 et 19).
II.3.3.2. Dénombrement et recherche de la flore contenue dans les oursins
Notre étude consiste à l’analyse bactériologique des oursins afin de comparer les résultats
avec ceux obtenus pour les eaux de surface dans lesquelles ils se trouvent naturellement. Les
différentes étapes de préparation de la suspension mère et des dilutions sont illustrées dans la figure
20.
a) Recherche et dénombrement des coliformes
 Ensemencement en profondeur
A partir des dilutions préparées, à l’aide d’une pipette Pasteur, mettre 20 gouttes de chaque
dilution sur le fond d’une boite de Pétri petite, répéter l’opération deux fois pour chaque dilution,
Numéroter successivement, couler sur la gélose de désoxycholate 1‰ fondue puis refroidie à 45°C.
Bien homogénéiser l’inoculum et la gélose en faisant des mouvements circulaires et de va et vient
en forme de « 8 » et laisser solidifier. Incuber les boites pendant 24 - 48 heurs à 37°C pour les
coliformes totaux et à 44°C pour les thermo tolérants.
 Lecture :
Le dénombrement des coliformes se fait par comptage des colonies fluorescentes.
Evaluation du nombre de CT :
- Retenir les boites de deux dilutions successives donnant une numération comprise entre 15
et 150 colonies.
du nbre des colonies des 2 boites retenues
CT =
1,1 . d
Avec :
1,1 : constante
d : première dilution retenue