Chapitre II
Matériel et méthodes
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- Ajouter 15 ml de la gélose viande-foie additionnée des additifs sulfites de sodium et Alun
de fer;
- Laisser solidifier puis incuber à 37°C pendant 24-48 heures.
 Lecture : Dénombrer les colonies blanches entourées d'un halo noir. Exprimer les
résultats par gramme de chair.
e) Recherche et dénombrement des Levures et Moisissures (Figure 21)
 Mode opératoire
A partir des dilutions préparées, Etaler 2 gouttes sur une boite de Pétri contenant de la gélose
Sabouraud, à l’aide d’un râteau stérile, puis mettre les boites dans un endroit propre à la température
ambiante. La lecture se fait quotidiennement pendant 5 jours.
II.3.3.3. Recherche et numération des bactéries dans les sédiments (Figure 22)
Dans ce cas la technique utilisée est celle des tubes multiples basée sur l’ensemencement de
plusieurs séries de tubes contenant des milieux de culture liquides, puis la détermination du nombre
caractéristique (nombre de tubes positifs pour chaque dilution qui permettra l'établissement du
nombre le plus probable, par le calcul ou la consultation de la table de Mc Grady (Annexe II).
En effet, prendre 25g de sédiment à analyser et lui rajouter 225 ml d’eau distillée stérile dans
un flacon stérile, bien homogénéiser le tout (dilution mère : 10
-1
), prendre 10 ml à l’aide d’une
pipette graduée stérile de DM pour la mettre dans un tube stérile (10
-1
), de même préparer d’autre
dilutions : 10
-2 et 10
-3
.
II.3.3.3.1. Numération des coliformes totaux et des coliformes fécaux
Après avoir agité ensemencer à partir de chaque dilution, 1 ml dans chaque tube contenant
10 ml du bouillon lactosé bilié au vert brillant (BLBVB) et une cloche de Durham, l’incubation se
fait à 37°C pour les tubes destinés à dénombrer les coliformes totaux et à 44°C pour les coliformes
fécaux pendant 48 h.
Lecture : Les tubes présentant un trouble avec production de gaz sont considérés comme positifs.
Le résultat est donné en nombre de germes pour 100ml en se référant à la table NPP.
II.3.3.3.2. Numération des streptocoques fécaux
La numération des streptocoques fécaux s’effectue en deux étapes :
a) Test présomptif
Ensemencer une série de tubes contenant 10ml du milieu Rothe simple concentré, par 1ml de
chaque dilution. L’incubation se fait à 37°C pendant 48 h.
Les tubes présentant un trouble accompagné d’un dépôt blanchâtre sont présumés de contenir
des streptocoques fécaux, ils seront soumis à un test confirmatif.
b) Test confirmatif
Chaque tube positif est ensemencé sur le bouillon de Eva Litsky, l’incubation s’effectue
pendant 48 h à 37°C. Les tubes présentant un trouble accompagné d’un dépôt formant une pastille
violette, contiennent des streptocoques fécaux.
II.3.3.3.3. Dénombrement des anaérobies sulfitoréductrices (ASR)
Procéder de la même manière que pour le dénombrement des clostridiums chez les oursins.
(Voir II.3.2.2.)
II.3.3.3.4. recherches des salmonelles et des vibrions
A partir des dilutions 10
-1 ensemencer 1ml dans un tube contenant 10ml de SFB et rajouter
deux disques de l’additif SFB pour la recherche des salmonelles.
Pour la recherche des vibrions, ensemencer un autre tube contenant de 10 ml d’EPA par 1 ml de la
dilution 10
-1
. La suite de la manipulation est analogue à celle effectuée pour l’eau. (Voir II.3.2.1.3.)