Deuxième partie
Matériel et méthodes
r
32
-On trace au crayon délicatement (afin de ne pas endommager la couche du gel de silice) une
ligne de départ à environ de 2cm du bord inférieur de la plaque (pour les plaques imprégnées,
le dépôt des échantillons doit se faire sur la partie non imprégnée
1
-Les dépôts d’échantillons doivent être espacés de 1,5 cm au minimum afin d’éviter leur
chevauchement lors de la migration.
C -Préparation du système éluant (phase mobile)
Acétonitrile : acétone (1 :1) ; 50 ml d’acétonitrile + 50 ml d’acétone.
Chloroforme : acide acétique (96 :4) ; 96 ml de chloroforme + 4 ml d’acide acétique.
Ether de pétrole : éther éthylique : acide acétique glacial (80:20:1) ; 80 ml d’éther de
pétrole, 20 ml d’éther éthylique et 1 ml d’acide acétique glacial.
D -Préparation de la cuve de développement
-Sous hotte, On verse l’éluant dans la cuve de développement de manière à ce que son niveau
atteigne une hauteur d’environ un centimètre.
-On couvre la cuve avec le couvercle pour la saturer en vapeurs de l’éluant (le couvercle est
enrobé de graisse pour assurer l’étanchéité (figure N°11, annexe II).
E -Dépôt des échantillons
-On dépose à l’aide d’une micropipette sur la ligne de départ une goutte (environ 10µl) de
chaque échantillon à analyser ainsi que l’étalon (acide linoléique) (Figure N° II.7).
-On Sèche la plaque à l’air libre, puis on la plonge dans la cuve de développement.
1 Le but est de faire d'abord migrer les substances sous forme d'un trait mince avec le front jusqu'à la zone
imprégnée ou la chromatographie proprement dite se fait ; il s'ensuit une séparation particulièrement poussée qui
donne des tâches rectangulaires.
Figure N° II.7 : Déposition des gouttes à l’aide d’une micropipette
sur la ligne de départ
Ligne du dépôt
Micropipette
Matériel et méthodes
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-On trace au crayon délicatement (afin de ne pas endommager la couche du gel de silice) une
ligne de départ à environ de 2cm du bord inférieur de la plaque (pour les plaques imprégnées,
le dépôt des échantillons doit se faire sur la partie non imprégnée
1
-Les dépôts d’échantillons doivent être espacés de 1,5 cm au minimum afin d’éviter leur
chevauchement lors de la migration.
C -Préparation du système éluant (phase mobile)
Acétonitrile : acétone (1 :1) ; 50 ml d’acétonitrile + 50 ml d’acétone.
Chloroforme : acide acétique (96 :4) ; 96 ml de chloroforme + 4 ml d’acide acétique.
Ether de pétrole : éther éthylique : acide acétique glacial (80:20:1) ; 80 ml d’éther de
pétrole, 20 ml d’éther éthylique et 1 ml d’acide acétique glacial.
D -Préparation de la cuve de développement
-Sous hotte, On verse l’éluant dans la cuve de développement de manière à ce que son niveau
atteigne une hauteur d’environ un centimètre.
-On couvre la cuve avec le couvercle pour la saturer en vapeurs de l’éluant (le couvercle est
enrobé de graisse pour assurer l’étanchéité (figure N°11, annexe II).
E -Dépôt des échantillons
-On dépose à l’aide d’une micropipette sur la ligne de départ une goutte (environ 10µl) de
chaque échantillon à analyser ainsi que l’étalon (acide linoléique) (Figure N° II.7).
-On Sèche la plaque à l’air libre, puis on la plonge dans la cuve de développement.
1 Le but est de faire d'abord migrer les substances sous forme d'un trait mince avec le front jusqu'à la zone
imprégnée ou la chromatographie proprement dite se fait ; il s'ensuit une séparation particulièrement poussée qui
donne des tâches rectangulaires.
Figure N° II.7 : Déposition des gouttes à l’aide d’une micropipette
sur la ligne de départ
Ligne du dépôt
Micropipette