Deuxième partie
Matériel et méthodes
r
31
II.2.1.2-CCM de partage
Dans ce cas, on parle de chromatographie de partage du fait qu'on se trouve en présence d'une
phase stationnaire non polaire (paraffine liée au support) et une phase mobile polaire
(solvant).
Lorsque la plaque sur laquelle on a déposé l'échantillon (substance) est placée dans la cuve,
l'éluant monte à travers la phase stationnaire, essentiellement par capillarité. La vitesse de
migration de chaque substance est donnée par le RF.
II.2.2-Mode opératoire
A -Préparation des échantillons
Le résidu des lipides extrait dans chaque ballon a été récupéré par l’ajout de 2 ml d’éther
éthylique pour le 1
er essai et 2 ml de chloroforme pour le 2
ème essai, les échantillons récupérés
(solvant + résidu) ont été filtrés et conservés dans des flacons bruns à l’intérieur d’un
réfrigérateur à 5°C (figure N°9, annexe II).
B -Préparation des plaques CCM
-Les plaques utilisés sont des plaques en gel silice prêtes à l’emploi : 20cm 20cm 0,20mm
(plaque de gel de silice 60 avec indicateur de fluorescence UV 254 , model : SIL G/UV 254 fur
die DCMACHEREY-NAGEL (figure N°10, annexe II).
-Les plaques ont été activées dans l’étuve à 110 °C pendant 30 mn, puis refroidies dans le
dessiccateur.
-Certains composants de lipides, nécessitent une séparation sur plaques imprégnés.
Imprégnation des plaques :
-On met la plaque de gel de silice avec beaucoup de précaution dans une solution
d’imprégnation (paraffine à 5% dans l’éther de pétrole, dodécane à 15% dans l’éther de
pétrole). On interrompe l’imprégnation après un parcours de 15 cm environ.
Figure N° II.6 : Imprégnation des plaques.
Imprégnation
au dodécane
Imprégnation
à la paraffine
Matériel et méthodes
r
31
II.2.1.2-CCM de partage
Dans ce cas, on parle de chromatographie de partage du fait qu'on se trouve en présence d'une
phase stationnaire non polaire (paraffine liée au support) et une phase mobile polaire
(solvant).
Lorsque la plaque sur laquelle on a déposé l'échantillon (substance) est placée dans la cuve,
l'éluant monte à travers la phase stationnaire, essentiellement par capillarité. La vitesse de
migration de chaque substance est donnée par le RF.
II.2.2-Mode opératoire
A -Préparation des échantillons
Le résidu des lipides extrait dans chaque ballon a été récupéré par l’ajout de 2 ml d’éther
éthylique pour le 1
er essai et 2 ml de chloroforme pour le 2
ème essai, les échantillons récupérés
(solvant + résidu) ont été filtrés et conservés dans des flacons bruns à l’intérieur d’un
réfrigérateur à 5°C (figure N°9, annexe II).
B -Préparation des plaques CCM
-Les plaques utilisés sont des plaques en gel silice prêtes à l’emploi : 20cm 20cm 0,20mm
(plaque de gel de silice 60 avec indicateur de fluorescence UV 254 , model : SIL G/UV 254 fur
die DCMACHEREY-NAGEL (figure N°10, annexe II).
-Les plaques ont été activées dans l’étuve à 110 °C pendant 30 mn, puis refroidies dans le
dessiccateur.
-Certains composants de lipides, nécessitent une séparation sur plaques imprégnés.
Imprégnation des plaques :
-On met la plaque de gel de silice avec beaucoup de précaution dans une solution
d’imprégnation (paraffine à 5% dans l’éther de pétrole, dodécane à 15% dans l’éther de
pétrole). On interrompe l’imprégnation après un parcours de 15 cm environ.
Figure N° II.6 : Imprégnation des plaques.
Imprégnation
au dodécane
Imprégnation
à la paraffine