Deuxième partie
Matériel et méthodes
r
30
On règle la température de la plaque chauffante à 100°C jusqu’à l’ébullition du
solvant, après on réduit la température à 60°C de sorte à maintenir l’ébullition du
solvant stable.
Pour l’épuisement complet du solide, on garde le rythme pendant 2h30 qui correspond
à 30 cycles (un cycle dure en moyenne 5mn), après on arrête le système et on laisse les
ballons refroidir.
On place le ballon contenant le solvant et l’extrait (lipides) dans un rota-vapeur à 40°C
(éther éthylique) et à 50°C pour le chloroforme et à une vitesse de rotation de 6 à 7
tours/mn, pour concentrer l'extrait et récupérer le solvant (figure N°8, annexe II).
On sèche le ballon dans l’étuve à 37°C, puis on le laisse refroidir dans un dessiccateur
et on le pèse, soit P ce poids.
La quantité des lipides totaux est déterminée par la formule suivante Source : (in Salghi.
R, 2004)
M : quantité des lipides (P-Po) en g.
P : poids du ballon rempli de lipides en g.
P 0 : poids de ballon vide en g.
m : poids de la prise d’essai de la chair du poisson en g.
II.2-Analyse qualitative
L'analyse qualitative pour identifier les différents composants de lipides a été réalisée au
laboratoire de biochimie de l'ENSSMAL.
II.2.1- Principe de la chromatographie sur couches minces
II.2.1.1-CCM d’adsorption
La chromatographie d’adsorption est basée sur des liaisons réversibles que forment les
substances avec certains adsorbants comme la silice. Les phénomènes d’adsorption et de
résorption qui sont en concurrence constituent le principe de base de la CCM.
Les lipides extraits seront déposés puis séparés par CCM sur une plaque de gel de silice. La
silice (SiO2) est hydrophile et va donc lier les composés polaires plus fortement que les
composés non polaires, quand la phase mobile, où l’éluant (peu polaire) monte par capillarité.
La vitesse de migration de la substance (échantillon) est donnée par le RF(rapport frontal).
% lipides =
Matériel et méthodes
r
30
On règle la température de la plaque chauffante à 100°C jusqu’à l’ébullition du
solvant, après on réduit la température à 60°C de sorte à maintenir l’ébullition du
solvant stable.
Pour l’épuisement complet du solide, on garde le rythme pendant 2h30 qui correspond
à 30 cycles (un cycle dure en moyenne 5mn), après on arrête le système et on laisse les
ballons refroidir.
On place le ballon contenant le solvant et l’extrait (lipides) dans un rota-vapeur à 40°C
(éther éthylique) et à 50°C pour le chloroforme et à une vitesse de rotation de 6 à 7
tours/mn, pour concentrer l'extrait et récupérer le solvant (figure N°8, annexe II).
On sèche le ballon dans l’étuve à 37°C, puis on le laisse refroidir dans un dessiccateur
et on le pèse, soit P ce poids.
La quantité des lipides totaux est déterminée par la formule suivante Source : (in Salghi.
R, 2004)
M : quantité des lipides (P-Po) en g.
P : poids du ballon rempli de lipides en g.
P 0 : poids de ballon vide en g.
m : poids de la prise d’essai de la chair du poisson en g.
II.2-Analyse qualitative
L'analyse qualitative pour identifier les différents composants de lipides a été réalisée au
laboratoire de biochimie de l'ENSSMAL.
II.2.1- Principe de la chromatographie sur couches minces
II.2.1.1-CCM d’adsorption
La chromatographie d’adsorption est basée sur des liaisons réversibles que forment les
substances avec certains adsorbants comme la silice. Les phénomènes d’adsorption et de
résorption qui sont en concurrence constituent le principe de base de la CCM.
Les lipides extraits seront déposés puis séparés par CCM sur une plaque de gel de silice. La
silice (SiO2) est hydrophile et va donc lier les composés polaires plus fortement que les
composés non polaires, quand la phase mobile, où l’éluant (peu polaire) monte par capillarité.
La vitesse de migration de la substance (échantillon) est donnée par le RF(rapport frontal).
% lipides =