Chapitre II
Matériel et méthodes
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5.3. Test d’oxydase
La recherche de l’oxydase est l’un des critères les plus employés pour l’identification des
bactéries, surtout celles des bacilles à (Gram -) .Elle consiste à mettre en évidence la capacité de la
bactérie testée à oxyder la forme réduite incolore de dérivés N-méthylés du paraphyényléne
diamine, en leur forme oxydée semi quinonique rose violacé. (Jean et Guy,1996).
 Technique
Ce test est réalisé à l’aide des disques d’oxydase de marque « HIMEDIA
® ».
 Imprégner le disque par une goutte d’eau distillée stérile ;
 Prendre une colonie à l’aide d’une pipette pasteur stérile et la déposer sur le disque.
 Lecture
 Apparition d’une tache violette au bout de 30 secondes donc la bactérie possède le
cytochrome oxydase (oxydase+)
 Autre couleur , la bactérie est oxydase-.
5.4. Test TSI
La gélose TSI (Triple Sugar Iron) permet l’identification des entérobactéries par la mise en
évidence rapide de la fermentation du lactose, du glucose (avec ou sans production de gaz), du
saccharose et de la production de sulfure d’hydrogène.
a. Mode opératoire
- A partir d’une colonie suspecte prélevée sur un milieu d’isolement sélectif, ensemencer le culot
par piqûre centrale et la surface inclinée par des stries serrées.
- Incuber à 37°C pendant 18-24 heures.
b. Lecture
L’utilisation de l’un des sucres contenus dans le milieu se traduit par une acidification (virage au
jaune du rouge de phénol). Une alcalinisation se révèle par une coloration rouge foncé. La
production de sulfure d’hydrogène à partir du thiosulfate est mise en évidence par la formation
d'une coloration noire.
Figure II.22 : Test d’oxydase