Chapitre II
Matériel et méthodes
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5. Techniques de caractérisation et d’identification de quelques bactéries :
5.1. Coloration de Gram
Cette coloration des cellules bactériennes permet à la fois de connaitre la morphologie des
bactéries et de les classer en deux groupes en fonction de leur capacité ou non à retenir la coloration
violette du cristal violet dans les conditions opératoires. Cette division découle principalement de
différences dans la structure des parois cellulaires des deux groupes. (Jean et Monique,1997).
Protocole de la coloration de Gram
 Préparer un frottis d’une culture bactérienne pure.
 Recouvrir le frottis de violet de Gentiane ; laisser agir une minute ; rincer à l’eau ordinaire.
 Verser du Lugol et le laisser agir pendant une minute ; rincer à l’eau ordinaire.
 Décolorer à l’alcool à 95%, 45 secondes ; rincer à l’eau ordinaire.
 Recolorer avec la Fushine pendant 20 secondes ; rincer à l’eau ordinaire.
 Sécher au –dessus de la flamme d’un bec benzène.
Les cellules Gram négatif apparaissent roses et les cellules Gram positif apparaissent sous une
couleur violette (Singleton et Sainsbury, 1984)
5.2. Test de la catalase
La catalase est une enzyme présente chez la plus part des bactéries aérobies strictes et
certaines anaérobies facultatives. Elle permet de détruire des peroxydes formés au cours de réaction
de l’oxydation ( Dellarras et Bernard ., 2003) .
Technique
Prélever une colonie et déposer sur une lame propre. Ajouter une goutte de H 2 O 2 sur les
bactéries.
 Lecture
Si la souche examinée possède une catalase, on observe un dégagement immédiat de bulles
gazeuses. La réaction catalysée est la suivante :
2H 2 O 2
O 2 + 2H 2 O
Figure II.21 : Test de catalase