Chapitre Ш
Matériel et méthodes
40
a) Dénombrement des Coliformes totaux et Coliformes thermotolérants «fécaux»
Le milieu nutritif « gélose Tergitol" est utilisé pour le dénombrement des coliformes,
après filtration, les boites sont incubées à 37°C pour les coliformes totaux et à 44°C pour les
coliformes thermotolérants. Après 24 ou 48 heures, on voit apparaitre éventuellement une
prolifération d’une colonie qui pourrait être le micro-organisme recherché (Jean-Bernard,
1999). (Figure 20).
b) Dénombrement des Streptocoques fécaux
La technique de recherche des streptocoques fécaux indiquée dans la figure 21 nécessite
deux tests consécutifs :
Un test présomptif : Il est réalisé sur le milieu de Slanetz et Bartley avec une incubation à
37°C pendant 24 à 48h, pour dénombrer les colonies rouges).
Un test confirmatif : Il est réalisé sur le milieu BEA (déposer la membrane précédente sur
BEA, 20 mn après dénombrer les colonies noires).
c) Dénombrement des Staphylocoques
Après filtration, appliquer la membrane sur la Gélose Chapman. Incuber à 37°C durant 24
à 48 heures. Les souches de Staphylococcus aureus sont de taille importante et élaborent leur
propre pigment ; elles apparaissent en jaune doré, surmontant une zone jaune du milieu sous
la membrane (virage du milieu), par suite de la fermentation de mannitol (figure 20).
Ш.2.6.1.2. Dénombrement des germes sulfitoréducteurs
On peut dénombrer les spores de clostridies, en général de Clostridium perfringens, ce
bacille à Gram+, anaérobie, sporogène, se rencontre normalement dans les matières fécales
humaines et animales. Ses spores peuvent survivre dans l’eau et dans l’environnement
pendant plusieurs mois.
Le mode opératoire de cette technique est consigné dans le tableau suivant :
Tableau.2 : Technique de recherche des anaérobies sulfitoréducteurs.
Mode opératoire
Résultats
Aspect d’un tube
positif
Aspect d’un tube
négatif
La gélose viande foie (VF) est
régénérée par ébullition au
bain-marie.
On rajoute une ampoule
d’Alun de fer et une de sulfite
de sodium à 250 ml de gélose.
Les tubes contenant 5 ml
d’échantillon sont maintenus à
80°C pendant 10 mn.
On rajoute 15 ml de la gélose
(VF) à l’aide une pipette
graduée et stérilisée.
Laisser refroidir.
Les tubes sont incubés à 37°C
pendant 24 h.
Les résultats sont
directement obtenus
par le comptage de
spores
qui
ont
germées.
Ces résultats sont
exprimés en (spores /
20 ml).
Matériel et méthodes
40
a) Dénombrement des Coliformes totaux et Coliformes thermotolérants «fécaux»
Le milieu nutritif « gélose Tergitol" est utilisé pour le dénombrement des coliformes,
après filtration, les boites sont incubées à 37°C pour les coliformes totaux et à 44°C pour les
coliformes thermotolérants. Après 24 ou 48 heures, on voit apparaitre éventuellement une
prolifération d’une colonie qui pourrait être le micro-organisme recherché (Jean-Bernard,
1999). (Figure 20).
b) Dénombrement des Streptocoques fécaux
La technique de recherche des streptocoques fécaux indiquée dans la figure 21 nécessite
deux tests consécutifs :
Un test présomptif : Il est réalisé sur le milieu de Slanetz et Bartley avec une incubation à
37°C pendant 24 à 48h, pour dénombrer les colonies rouges).
Un test confirmatif : Il est réalisé sur le milieu BEA (déposer la membrane précédente sur
BEA, 20 mn après dénombrer les colonies noires).
c) Dénombrement des Staphylocoques
Après filtration, appliquer la membrane sur la Gélose Chapman. Incuber à 37°C durant 24
à 48 heures. Les souches de Staphylococcus aureus sont de taille importante et élaborent leur
propre pigment ; elles apparaissent en jaune doré, surmontant une zone jaune du milieu sous
la membrane (virage du milieu), par suite de la fermentation de mannitol (figure 20).
Ш.2.6.1.2. Dénombrement des germes sulfitoréducteurs
On peut dénombrer les spores de clostridies, en général de Clostridium perfringens, ce
bacille à Gram+, anaérobie, sporogène, se rencontre normalement dans les matières fécales
humaines et animales. Ses spores peuvent survivre dans l’eau et dans l’environnement
pendant plusieurs mois.
Le mode opératoire de cette technique est consigné dans le tableau suivant :
Tableau.2 : Technique de recherche des anaérobies sulfitoréducteurs.
Mode opératoire
Résultats
Aspect d’un tube
positif
Aspect d’un tube
négatif
La gélose viande foie (VF) est
régénérée par ébullition au
bain-marie.
On rajoute une ampoule
d’Alun de fer et une de sulfite
de sodium à 250 ml de gélose.
Les tubes contenant 5 ml
d’échantillon sont maintenus à
80°C pendant 10 mn.
On rajoute 15 ml de la gélose
(VF) à l’aide une pipette
graduée et stérilisée.
Laisser refroidir.
Les tubes sont incubés à 37°C
pendant 24 h.
Les résultats sont
directement obtenus
par le comptage de
spores
qui
ont
germées.
Ces résultats sont
exprimés en (spores /
20 ml).