Chapitre Ш
Matériel et méthodes
39
Ш.2.6. Analyse microbiologique
Les germes tests recherchés sont les coliformes totaux, les coliformes fécaux dont
Escherichia coli et les streptocoques fécaux. Ces germes sont peu ou pas pathogènes, ils sont
révélateurs de contamination fécale et entrainent par leur abondance la présomption de
contamination plus dangereuse.
Les germes supplémentaires recherchés sont les germes pathogènes (salmonelles et
vibrions) et les staphylocoques et cela pour leurs intérêts pratiques concernant les eaux de
plages polluées.
La méthode de détermination du nombre le plus probable (NPP) par inoculation des
tubes en milieu liquide a été utilisé pour la recherche de ces germes (Joly et Reynaud, 2003).
La détermination du nombre caractéristique (le nombre de tubes positifs) permettra
l’établissement du nombre le plus probable par la consultation de la table de Mc Grady (voir
annexe П) (Brisou et Denis, 1980 ; Rodier et al, 1996).
Ш.2.6.1. Analyse bactériologique de l’eau de mer
Ш.2.6.1.1.Dénombrement des coliformes totaux, fécaux, des streptocoques fécaux et des
staphylocoques
On utilise la méthode de filtration sur membrane pour estimer la charge bactérienne dans
notre zone d’étude.
Elle consiste à recueillir, sur une membrane stérile un volume donné de produit à analyser
(eau usée, eau épurée et l’eau de mer), la membrane est ensuite déposée sur un milieu nutritif
convenable. Après incubation, les colonies sont dénombrer et identifier (Champiat et al,
1994).
Matériel
- Dispositif de filtration de marque « Sartorius stedim » ;
- Bec-bunsen pour garder tout au long de la manipulation la zone de travail stérile ;
- Boites de Pétri avec les milieux de cultures spécifiques pour chaque germe ;
- Membranes d’ester de cellulose, filtrantes, quadrillées et stérile (en emballage
individuel) de porosité de 0,45 µm et de 47 mm de diamètre susceptibles de retenir
les bactéries ;
- Deux incubateurs (l’un réglé à 37 °C et l’autre à 44°C) ;
- Pompe à vide ;
- Pinces stérilisées et pipettes.
Mode opératoire
- Stériliser le dispositif de filtration ;
- Mettre en place le dispositif ;
- Mettre le filtre sur la grille ;
- Filtrer un volume d’échantillon (100ml) ;
- Déposer le filtre sur le milieu de culture adapté pour chaque bactérie
recherchée ;
- Incuber les boites à la température adéquate.
La composition des milieux de culture et des réactifs utilisés sont consignées en annexe II.
Matériel et méthodes
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Ш.2.6. Analyse microbiologique
Les germes tests recherchés sont les coliformes totaux, les coliformes fécaux dont
Escherichia coli et les streptocoques fécaux. Ces germes sont peu ou pas pathogènes, ils sont
révélateurs de contamination fécale et entrainent par leur abondance la présomption de
contamination plus dangereuse.
Les germes supplémentaires recherchés sont les germes pathogènes (salmonelles et
vibrions) et les staphylocoques et cela pour leurs intérêts pratiques concernant les eaux de
plages polluées.
La méthode de détermination du nombre le plus probable (NPP) par inoculation des
tubes en milieu liquide a été utilisé pour la recherche de ces germes (Joly et Reynaud, 2003).
La détermination du nombre caractéristique (le nombre de tubes positifs) permettra
l’établissement du nombre le plus probable par la consultation de la table de Mc Grady (voir
annexe П) (Brisou et Denis, 1980 ; Rodier et al, 1996).
Ш.2.6.1. Analyse bactériologique de l’eau de mer
Ш.2.6.1.1.Dénombrement des coliformes totaux, fécaux, des streptocoques fécaux et des
staphylocoques
On utilise la méthode de filtration sur membrane pour estimer la charge bactérienne dans
notre zone d’étude.
Elle consiste à recueillir, sur une membrane stérile un volume donné de produit à analyser
(eau usée, eau épurée et l’eau de mer), la membrane est ensuite déposée sur un milieu nutritif
convenable. Après incubation, les colonies sont dénombrer et identifier (Champiat et al,
1994).
Matériel
- Dispositif de filtration de marque « Sartorius stedim » ;
- Bec-bunsen pour garder tout au long de la manipulation la zone de travail stérile ;
- Boites de Pétri avec les milieux de cultures spécifiques pour chaque germe ;
- Membranes d’ester de cellulose, filtrantes, quadrillées et stérile (en emballage
individuel) de porosité de 0,45 µm et de 47 mm de diamètre susceptibles de retenir
les bactéries ;
- Deux incubateurs (l’un réglé à 37 °C et l’autre à 44°C) ;
- Pompe à vide ;
- Pinces stérilisées et pipettes.
Mode opératoire
- Stériliser le dispositif de filtration ;
- Mettre en place le dispositif ;
- Mettre le filtre sur la grille ;
- Filtrer un volume d’échantillon (100ml) ;
- Déposer le filtre sur le milieu de culture adapté pour chaque bactérie
recherchée ;
- Incuber les boites à la température adéquate.
La composition des milieux de culture et des réactifs utilisés sont consignées en annexe II.