Troisième partie : Résultat et discussions
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8. Recherche de Listeria monocytogenes (GUIRAUD et ROSEC, 2004) :
Mode opératoire: (figure 07) :
Préparer une suspension mère dans l’eau peptonée tamponnée en réalisant une
dilution au 1/10, la laisser reposer à 20
o
C ± 2
o
C pendant 1h ± 5 min pour la
revivification des bactéries stressées. Réaliser les dilutions nécessaires et étaler 0.1 ml
de la suspension mère et les dilutions sur la gélose Columbia (ou gélose au sang)
additionnée de 5% de sang humain frais, incuber à 37
o
C pendant 24-48h.
B. Lecture :
Les Listeria donnent des Colonies bleu- gris, β-hémolytiques sur gélose Columbia
au sang (ou sur gélose au sang). La β-hémolyse se traduit par une zone claire
facilement visible entourant les colonies. Cet éclaircissement est dû à la capacité des
bactéries à détruire complètement les globules rouges (ANONYME 2, 1987).
C. Confirmation :
Confirmer l’identité de 5 colonies suspectes par :
 Isolement des colonies sur gélose Columbia au sang ou gélose au sang.
 Coloration de Gram (Gram +).
 Test de la catalase (catalase+).
 Test de l’oxydase (oxydase-).
9. Recherche et dénombrement de Vibrio parahaemolyticus (Norme XP
ISO/TS 21872-1) (Figure 08).
A. Mode opératoire :
Préparer la suspension mère dans une eau peptonée salée alcaline (EPSA) à 30g de
Na Cl par litre et pH 8.8 en réalisant une dilution au 1/10. Incuber durant 6h à 37
o
C.
Ensemencer une nouvelle EPSA avec 1 ml de la suspension précédente et l’incuber
18h à 44
o
C puis isolé sur milieu au Thiosulfate, au Citrate, à la Bile et au Saccharose
(TCBS).
B. Lecture :
Les colonies suspectes sont incolores à centre vert.
C. Confirmation :
 coloration de Gram (Gram-),
 test de la catalase (catalase+),
 test d’oxydase (oxydase+).