Deuxième partie : Matériel et méthodes
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b) Choix de diluant :
Le choix du diluant est fonction du produit à analyser et le type de microorganisme à
rechercher (JOFFIN et JOFFIN, 2010) :
Le bouillon au sélénite et à la cystine (BSC) a servi de diluant pour les
salmonelles, l’eau peptonée alcaline salée pour les vibrions. Alors que, l’eau peptonée
tamponnée a été utilisée pour le reste des micro-organismes.
4. Dénombrement en milieu solide :
Les dénombrements en milieux solides ont été réalisés selon les recommandations de
JOFFIN et JOFFIN, 2010.
A. Technique de dénombrement en profondeur (dans la masse) :
 liquéfier le milieu gélosé et le ramener en surfusion (45°C),
 prélever 1 ml de la dilution et l’introduire dans des boites de Pétri en déposant des
gouttes au fond de la boite (on commence par la plus grande dilution, afin
d’utiliser qu’une seule pipette sans introduire des erreurs),
 couler aseptiquement le milieu gélosé maintenu en surfusion et homogénéiser en
imprimant à la boite des mouvements circulaires (en 8),
 après la solidification du milieu gélosé, étuver pour une durée et une température
précises.
B. Technique de dénombrement en surface :
 couler le milieu adéquat dans des boites de Pétri stériles et laisser solidifier,
 prélever 0.1 ml de dilution la plus grande et la déposer en surface du milieu,
 poursuivre ainsi pour toutes les dilutions, toujours stérilement,
 étaler à l’aide d’une pipette râteau ou à l’aide d’un étaleur stérile,
 étuver pour une température et une durée précise.
C. Lecture :
=
∑
. ( + ,
)
. .
∑ C= somme des colonies des boites comptées
V = volume de l’inoculum
n 1 = nombre de boites comptées à la plus faible dilution.
n 2 = nombre de boites comptées à la plus forte dilution.
d= dilution correspondante à la plus faible
f= fraction de colonies identifiées (en général 1).