Matériel et méthodes
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Tableau 2 : Les différents antibiotiques en disque utilisés pour l’antibiogramme
Famille
Antibiotiques
Charge (µg) Abréviation
Quinolones
Acide nalidixique
30
NA
Ciprofloxacin
5
CIP
Aminosides
kanamycine
30 UI
K
gentamicine
30
CN
II.3. Recherche des gènes de résistance aux quinolones par PCR
Le but de cette étude a été d’évaluer et de caractériser les mécanismes génétiques plasmidique
de la résistance aux quinolones retrouvées chez 25 souches isolées à partir d’un site d’élevage
et sauvage.
-Principe de la PCR classique :
La PCR est une technique basée sur l’hybridation spécifique des amorces avec le gène
recherché. Elle permet l’amplification in vitro une partie spécifique d'un acide nucléique
donné (ADN ou ARN) afin d'en obtenir une quantité suffisante pour détecter le fragment cible
balisé par ces deux amorces.
Le processus nécessite la succession d’un certain nombre de cycles (20-40), chaque cycle
comporte les étapes suivantes :
 La dénaturation de l’ADN à 94°C.
 L’hybridation : fixation des amorces de part et d’autre du fragment à amplifier (4060°C).
 L’élongation : la synthèse du brin d’ADN est assurée par la Taq polymérase à 72°C,
en respectant la complémentarité des bases.
- Principe de la PCR multiplexe :
Est une technique de biologie moléculaire généralisée pour l'amplification de cibles multiples
dans une expérience unique PCR. Dans un dosage de multiplexage, plus d'une séquence cible
peut être amplifié par l'utilisation de plusieurs paires d'amorces dans un mélange réactionnel.
Dans le prolongement de l'utilisation pratique de la PCR, cette technique a le potentiel de
réaliser des économies considérables en temps et en effort dans le laboratoire sans compromis
sur l'utilité de l'expérience.