Matériel et méthodes
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-Principe
Cette technique est basée sur l’observation de la croissance bactérienne en présence d’un
gradient de concentration d’antibiotiques, obtenu par diffusion à partir des disques
d’antibiotiques dans un milieu gélosé (Muller Hinton). Ce gradient est inversement
proportionnel à la distance par rapport aux disques. La croissance s’arrête lorsque les
bactéries sont en contact avec leur concentration minimale d’inhibition dessinant des halos
d’inhibition autour des disques d’antibiotiques (Courvalin et al, 1985).
-Technique
 A partir d’une culture jeune (18-24h), préparer dans 5ml d’eau
physiologique stérile une suspension bactérienne de 0,5McFarland (10
8
cellules/ml),
 Ajuster l’inoculum à 10
7 cellules/ml.
 Plonger un écouvillon stérile dans la suspension bactérienne de 10
7
cellules/ml.
 Ensemencer la boite en frottant l’écouvillon sur la totalité de la surface
gélosée et en tournant la boite trois fois de 60° afin d’assurer une bonne
distribution de l’inoculum.
 Appliquer les disques d’antibiotiques (Tableau8) selon le schéma de la
(Figure13).
 Laisser diffuser pendant 15 minutes, à température ambiante,
Incuber à 35°C pendant 18-24h
-Lecture
Mesurer avec précision les diamètres d’inhibition à l’aide d’une règle graduée et classer les
bactéries dans l’une des catégories : sensible (S), intermédiaire (I) ou résistant (R) selon les
valeurs critiques (CA-SFM, 2011)
CN
NA
K
CIP
Figure 13 : Schéma de la disposition des antibiotiques des antibiotiques