Matériel et méthodes
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II Méthodes
II.1. Identification biochimique bactériennes par galerie API 20 E
La galerie API 20E est un système d’identification des entérobactéries et autres bacilles à
Gram négatif. Elle comporte 20 tests biochimiques standardisés et miniaturisés. Les milieux
desséchés sont réhydratés avec une suspension bactérienne à identifiée. Les réactions
produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou
révélés par l’addition de réactifs (Biomérieux).
-Technique
 Réunir fond et couvercle d’une boite d’incubation et répartir environ 5ml d’eau
distillée dans les alvéoles afin de créer une atmosphère humide.
 Retirer la galerie stérile de son emballage et la déposer dans la boite
d’incubation.
 Ecrire nom, référence de la souche et date sur la languette latérale du fond de
la boite.
 Préparer l’inoculum bactérien : mettre 1 à 3 colonies jeunes bien isolées dans 5
ml d’eau distillée stérile,
 Inoculer la galerie comme suit :
- Remplir à l’aide d’une micropipette les tubes et cupules des tests
(CIT, VIP et GEL).
- Remplir uniquement les tubes (et non les cupules) des autres tests.
- Créer une anaérobiose dans les tests : ADH, LCD, ODC, H 2 S, URE
en remplissant leur cupule d’huile de vaseline.
 Refermer la boite d’incubation et la placer dans l’étuve à 37°C pendant 1824h.
 Le test d’oxydase est réalisé par le dépôt d’un inoculum bactérien sur le disque
d’oxydase. La présence du cytochrome oxydase se traduit par l’apparition
d’une coloration violette.
- Lecture de la galerie
Après codification des réactions en un profil numérique, l’identification est obtenue on
se référant à un catalogue analytique fourni par Biomérieux où l’identification est donnée
avec un pourcentage et une appréciation (Biomérieux).
II.2. Diffusion en milieu gélosé : antibiogramme
L’étude de la résistance de nos souches vis-à-vis de 4 antibiotiques a été réalisé par la
méthode de diffusion en milieu solide (Courvalin, 1985 ; CA-SFM, 2011).