Chapitre II : Techniques d’analyse
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II.2.2.1. La méthode d’ELISA :
ELISA est le sigle anglais pour Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay. Ce terme
regroupe les tests utilisant un marqueur enzymatique lié de façon covalente à un anticorps ou
à un antigène. A partir d’un substrat chromogène, incolore, spécifique de l’enzyme couplée,
celle-ci est capable de catalyser une réaction générant un produit coloré. La densité optique
(DO) est proportionnelle à la quantité de substrat ayant réagi. (Baco, 2011)
Le principe d’ ELISA :
Les tests ELISA sont réalisés sur des plaques de micro-titration de 96 puits. Ces tests se font
en plusieurs étapes. Dans le cas d’un test ELISA direct, la procédure est la suivante :
 Dans un premier temps, l’antigène est déposé sur un support solide (généralement une
plaque de micro-titration) ;
 l’antigène est reconnu par un anticorps marqué par une enzyme.
 les anticorps en excès, non liés à l’antigène, sont éliminés lors de l’étape de rinçage ;
 l’ajout du substrat permet la réaction colorée dont la DO mesurée est proportionnelle à
la quantité d’antigène fixée sur le support solide (Baco, 2011).
Figure 18 : Plaque de microtitration (Baco, 2011)
Figure 19 : ELISA direct (Baco, 2011)