Chapitre II : Techniques d’analyse
30
Il est plus sensible que la méthode biologique, et permet d’obtenir le profil toxinique des
phycotoxines étudiées (Abou Abdellah, 2012).
II.2.1.2. Analyses chimiques par la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie
de masse (CL-SM/SM) :
La LC-MS/SM est basée sur un couplage entre la chromatographie liquide et la
spectrométrie de masse en tandem.
La chromatographie en phase liquide (liquid chromatography, LC) est une technique d'analyse
quantitative, qualitative et séparative. Ce type de chromatographie repose sur la séparation de
composés entraînés par un liquide (phase mobile) à travers un solide (phase stationnaire) qui
est placé dans une colonne chromatographique.
La spectrométrie de masse (mass spectrometry, MS) est une technique physique
d'analyse permettant de détecter et d'identifier des molécules d‘intérêt par mesure de leur
masse, et de caractériser leur structure chimique. Son principe réside dans la séparation en
phase gazeuse de molécules chargées (ions) en fonction de leur rapport masse/charge (m/z).
L‘utilisation de la LC-MS/MS pour la détection et la quantification des toxines lipophiles
a progressé rapidement et un nombre croissant de scientifiques considèrent que cette
technique est un moyen efficace comme méthode alternative au test souris puisqu‘elle garantit
plus de sélectivité, de sensibilité, de fiabilité et de rapidité (Amandi et al., 2002; Ciminiello et
al, 2002; Holland et al, 2002; Hess et al, 2003; Vale, 2004; Mac Nabbet al, 2005; Stobo et al,
2005; Hashimoto et al, 2006).
II.2.1.3. Electrophorèse capillaire :
L’électrophorèse capillaire (EC) est une technique prometteuse dont les applications, bien
que récentes, sont nombreuses. Cette technique offre des avantages non négligeables tels que
des temps d’analyse faible, des possibilités d’automatisation, des volumes d’injection (et donc
des quantités de matériel) réduits, l’emploi de tampon au lieu de solvant nocifs et un grand
nombre de paramètre sur lesquels il est possible d’agir (température, pH et concentration du
tampon, potentiel d’électrophorèse ; diamètre et longueur des capillaires, nature des parois…)
(IFREMER, 2001).
Le principe de séparation est basé sur le rapport taille/charge des espèces chimiques soumis
à un champ électrique. L’appareillage est constitué de deux récipients, remplis d’une solution
électrolyte tamponnée, dans lesquelles trempent les extrémités d'un tube capillaire (ø interne
entre 25 et 75 µm) ainsi que deux électrodes de platine. Le mélange à analyser est injecté par
pression dans le capillaire, puis une tension de plusieurs kilovolts est appliquée entre les deux
électrodes. Le champ électrique ainsi créé induit un mouvement des molécules et permet la
30
Il est plus sensible que la méthode biologique, et permet d’obtenir le profil toxinique des
phycotoxines étudiées (Abou Abdellah, 2012).
II.2.1.2. Analyses chimiques par la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie
de masse (CL-SM/SM) :
La LC-MS/SM est basée sur un couplage entre la chromatographie liquide et la
spectrométrie de masse en tandem.
La chromatographie en phase liquide (liquid chromatography, LC) est une technique d'analyse
quantitative, qualitative et séparative. Ce type de chromatographie repose sur la séparation de
composés entraînés par un liquide (phase mobile) à travers un solide (phase stationnaire) qui
est placé dans une colonne chromatographique.
La spectrométrie de masse (mass spectrometry, MS) est une technique physique
d'analyse permettant de détecter et d'identifier des molécules d‘intérêt par mesure de leur
masse, et de caractériser leur structure chimique. Son principe réside dans la séparation en
phase gazeuse de molécules chargées (ions) en fonction de leur rapport masse/charge (m/z).
L‘utilisation de la LC-MS/MS pour la détection et la quantification des toxines lipophiles
a progressé rapidement et un nombre croissant de scientifiques considèrent que cette
technique est un moyen efficace comme méthode alternative au test souris puisqu‘elle garantit
plus de sélectivité, de sensibilité, de fiabilité et de rapidité (Amandi et al., 2002; Ciminiello et
al, 2002; Holland et al, 2002; Hess et al, 2003; Vale, 2004; Mac Nabbet al, 2005; Stobo et al,
2005; Hashimoto et al, 2006).
II.2.1.3. Electrophorèse capillaire :
L’électrophorèse capillaire (EC) est une technique prometteuse dont les applications, bien
que récentes, sont nombreuses. Cette technique offre des avantages non négligeables tels que
des temps d’analyse faible, des possibilités d’automatisation, des volumes d’injection (et donc
des quantités de matériel) réduits, l’emploi de tampon au lieu de solvant nocifs et un grand
nombre de paramètre sur lesquels il est possible d’agir (température, pH et concentration du
tampon, potentiel d’électrophorèse ; diamètre et longueur des capillaires, nature des parois…)
(IFREMER, 2001).
Le principe de séparation est basé sur le rapport taille/charge des espèces chimiques soumis
à un champ électrique. L’appareillage est constitué de deux récipients, remplis d’une solution
électrolyte tamponnée, dans lesquelles trempent les extrémités d'un tube capillaire (ø interne
entre 25 et 75 µm) ainsi que deux électrodes de platine. Le mélange à analyser est injecté par
pression dans le capillaire, puis une tension de plusieurs kilovolts est appliquée entre les deux
électrodes. Le champ électrique ainsi créé induit un mouvement des molécules et permet la