Chapitre II : Techniques d’analyse
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Protocole :
Chair crue mixée (50 g)
Extraction au méthanol (100 ml)
Homogénéisation pdt 3 min
Filtration
Filtrat hydrométhanolique (=170 ml)
Ajouter du n-hexane (170 ml)
Agitation 1 min dans une ampoule à décanté
Filtrat hydrométhanolique lavé
Ajouter de l’eau distillée (170 ml) et mélanger
Extraction de phase hydrolméthanolique par l’éther diéthylique
(2 fois 340 ml)
Phases éthérées
Evaporation à sec au Rotavapor
Résidu
Ajouter du méthanol 80 % (2 ml)
Ajouter du n-hexane (2 ml)
Agitation, récupération
Résidu liposoluble
Repris dans 2ml de Tween 60 1% à 37°C et agitation
Injection
À 2 souris (18 à 24 g) à la dose : 0,04 ml /g de souris (c'est-à-dire une dose correspondant à un
équivalent gramme de chair de poisson par gramme de souris) ;
Observer pendant 24h et noter les décès éventuels et/ou peser les survivants ; interpréter la
comestibilité selon les résultats (IFREMER, 2001):
Mortalité observée
après injection de 1g
éq chair/g de souris
Concentration toxinique
dans la chair
Perte de poids à
24h (> 5%)
Interprétation
2/2
>= 1USg/g éq chair
Non
Non comestible
1/2
0,5 à 1USg/g éq chair
Oui
Non comestible
0/2
˂0,5 USg/g éq chair
Oui
Non
Frontière comestible
Figure 16: protocole d’analyse des ciguatoxines par la méthode de bioessai sur souris
(Frémy et Lassus, 2001).