CHAPITRE II
Matériel et méthodes
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g. Recherche et dénombrement des Salmonelles :
Les Salmonelles font l’objet d’une prise d’essai de 25g à part. Elles sont recherchées et identifiées
selon le protocole suivant :
Pré enrichissement :
Incuber le flacon de la Dilution mère (DM) à l’étuve à 37°C pendant 24 heures.
1
er enrichissement :
Après incubation, transférer la DM dans un bouillon SFB et ajouter 20 disques d’additifs SFB
(Sélénite acide de Sodium) puis réincuber à 37°C pendant 24 heures
1
er isolement :
A l’aide d’une pipette pasteur stérile, prélever une goutte du flacon du 1
er enrichissement et
l’ensemencer sur le milieu Hektoen en faisant des stries et l’incuber à 37°C pendant 24 heures.
2
ème enrichissement :
A partir du tube du 1
er enrichissement prélever 1ml à l’aide d’une micropipette et l’introduire
dans un tube contenant le milieu SFB pour lequel on ajoute un disque d’additif SFB, incuber pendant
24 heures à 37°C.
2
ème isolement :
A l’aide d’une pipette Pasteur stérile, prélever une goutte du tube du 2
ème enrichissement et
l’ensemencer sur le milieu Hektoen en faisant des stries et l’incuber à 37°C pendant 24 heures.
lecture :
Les salmonelles se présentent souvent sous forme de colonies bleu-vert à centre noir sur
gélose Hektoen. Ces colonies feront l’objet d’une identification morphologique et biochimique.
II.3.2.2.3. Techniques de caractérisation et d’identification des bactéries recherchées:
Afin de déterminer le profil biochimique et morphologique des bactéries isolées appartenant
aux groupes des coliformes, streptocoques fécaux, salmonelles, vibrions ,sulfitoréducteurs et
staphylocoques, une série de tests a été réalisée, il s’agit de :
a. Coloration de Gram :
Cette coloration ancienne, découverte par Hans Christian Joachim Gram en 1884, modifiée à
plusieurs reprises, demeure fondamentale plus de 120 ans plus tard, en bactériologie.
La coloration de Gram permet de diviser le monde bactérien en deux groupes distincts (Gram
+ et
Gram
-
), mais certaines bactéries peuvent présenter un Gram variable (DELARRAS, 2007).
Cette coloration permet en général d’apprécier la pureté des cultures bactériennes avant toute
identification.
Matériel et méthodes
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g. Recherche et dénombrement des Salmonelles :
Les Salmonelles font l’objet d’une prise d’essai de 25g à part. Elles sont recherchées et identifiées
selon le protocole suivant :
Pré enrichissement :
Incuber le flacon de la Dilution mère (DM) à l’étuve à 37°C pendant 24 heures.
1
er enrichissement :
Après incubation, transférer la DM dans un bouillon SFB et ajouter 20 disques d’additifs SFB
(Sélénite acide de Sodium) puis réincuber à 37°C pendant 24 heures
1
er isolement :
A l’aide d’une pipette pasteur stérile, prélever une goutte du flacon du 1
er enrichissement et
l’ensemencer sur le milieu Hektoen en faisant des stries et l’incuber à 37°C pendant 24 heures.
2
ème enrichissement :
A partir du tube du 1
er enrichissement prélever 1ml à l’aide d’une micropipette et l’introduire
dans un tube contenant le milieu SFB pour lequel on ajoute un disque d’additif SFB, incuber pendant
24 heures à 37°C.
2
ème isolement :
A l’aide d’une pipette Pasteur stérile, prélever une goutte du tube du 2
ème enrichissement et
l’ensemencer sur le milieu Hektoen en faisant des stries et l’incuber à 37°C pendant 24 heures.
lecture :
Les salmonelles se présentent souvent sous forme de colonies bleu-vert à centre noir sur
gélose Hektoen. Ces colonies feront l’objet d’une identification morphologique et biochimique.
II.3.2.2.3. Techniques de caractérisation et d’identification des bactéries recherchées:
Afin de déterminer le profil biochimique et morphologique des bactéries isolées appartenant
aux groupes des coliformes, streptocoques fécaux, salmonelles, vibrions ,sulfitoréducteurs et
staphylocoques, une série de tests a été réalisée, il s’agit de :
a. Coloration de Gram :
Cette coloration ancienne, découverte par Hans Christian Joachim Gram en 1884, modifiée à
plusieurs reprises, demeure fondamentale plus de 120 ans plus tard, en bactériologie.
La coloration de Gram permet de diviser le monde bactérien en deux groupes distincts (Gram
+ et
Gram
-
), mais certaines bactéries peuvent présenter un Gram variable (DELARRAS, 2007).
Cette coloration permet en général d’apprécier la pureté des cultures bactériennes avant toute
identification.