CHAPITRE II
Matériel et méthodes
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e. Recherche et dénombrement des staphylocoques :
 Technique d’ensemencement en surface :
- Transférer à l’aide d’une pipette stérile, 4 gouttes de dilutions décimales10
-3 à 10
-1 , à la surface
d’ne plaque de gélose Baird Parker ;
- Etaler soigneusement l’inoculum le plus rapidement possible à la surface de la gélose à l’aide
d’un râteau stérile pour chaque boite (essayer de ne pas toucher les bords de la boite).
- Incuber les boites couvercle en bas à 37°C pendant 48 heures.
 lecture :
Ce milieu contient une base nutritive riche, des accélérateurs de la croissance (le pyruvate de
sodium et le glycocolle) ainsi que 2 inhibiteurs : le chlorure de lithium et le tellurite de potassium. Les
caractères morphologiques des colonies de Staphylococcus aureus sur ce milieu sont les suivantes :
 Colonie à centre noir : réduction du tellurite en tellure
 Halo clair autour des colonies : protéolyse des protéines du jaune d’œuf.
 Liseré blanc opaque autour des colonies : présence d’une lécithinase hydrolysant les lécithines
en choline et diglycéride.
L’évaluation du nombre de bactéries par ml se fait selon la formule suivante :
N : Nombre de bactéries par ml (UFC/ml)
n : Nombre de colonies compté
d : dilution de l’échantillon
V : Volume de l’inoculum (ml)
f. Recherche et dénombrement des anaérobies sulfitoréducteurs :
 Mode opératoire :
- Prélever 1ml, à l’aide d’une micropipette stérile, de chaque dilution dans un tube à essai vide ;
- Incuber les tubes dans un bain marie à 80°C pendant 10 minutes pour éliminer toutes les
formes végétatives;
- Refroidir immédiatement et compléter avec la gélose viande foie additionnée des additifs
sulfites de sodium et Alun de fer;
- Laisser solidifier puis incuber à 37°C pendant 48 heures.
 Lecture :
Retenir les tubes contenant des colonies noires (qui sont en réalité blanches mais entourées d’une
auréole noire). Ils feront l’objet d’une identification biochimique.
n
N = —————— x d
V