CHAPITRE II
Matériel et méthodes
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c. Préparation des dilutions:
- A partir de la dilution mère, introduire aseptiquement à l’aide d’une micropipette stérile, 1ml dans
un tube à vis stérile contenant 9ml du diluant TSE, La dilution obtenue correspond à la dilution 10
-2 .
- Prélever 1 ml de la précédente dilution 10
-2 et introduire dans un tube à vis contenant 9ml du
diluant TSE, ce qui nous donne la dilution 10
-3 .
Le schéma suivant nous résume les étapes à suivre pour la réalisation des dilutions.
Figure 11 : Préparation des dilutions.
d. Recherche et dénombrement des coliformes et de la flore totale:
 Technique d’ensemencement en profondeur :
- A partir des dilutions décimales allant de 10
-3 à 10
-1 , porter aseptiquement 1ml dans chaque
boite de Pétri vide préparée à cet usage ;
- Numéroter successivement, couler sur la première série la gélose PCA fondue puis refroidie à
45°C pour la recherche des germes totaux, et la gélose Lactosée au cristal Violet pour la
recherche des CT et CF ;
- Bien homogénéiser l’inoculum et la gélose en faisant des mouvements circulaires et de va et
vient en forme de « 8 » et laisser solidifier.
 Incubation :
- La flore anaérobie mésophile totale : 30°C.
- Les Coliformes totaux : 35±2°C.
- Les coliformes fécaux : 44±0,5°C.
Pendant 24 à 72 heures
Pendant 24h