4.2.2.2.
Le test de catalase :
Cette enzyme catalyse la décomposition du peroxyde d’hydrogène (H 2 O 2 ) qui est produit par
certaines réactions cellulaires et est très toxiques, donc c’est l’une des enzymes chargée
d’éponger l’eau oxygénée par la dismutation (PELMONT, 1993 ; in Aichiou et Echchatabi,
2006). La réaction catalysée est la suivante :
2H 2 O 2
O 2 + 2H 2 O
Sur une lame de verre propre, déposer une goutte de peroxyde d'hydrogène (H 2 O 2 ) puis la
mettre en contact avec une colonie isolée prélevée à l’aide d’une pipette Pasteur. La présence
de catalase se traduit par l’apparition de bulles d’oxygène.
4.2.2.3.
Le test d’oxydase :
C’est un test fondamental pour orienter l’identification des bacilles Gram - . Il met en
évidence la présence dans les bactéries d’une enzyme appelée « la cytochrome oxydase » qui
est capable d’oxyder la forme réduite de dérivés « N-méthylés du paraphénylènediamine » en
semi-quinone caractérisé par une couleur rose violacée.
Ce test est réalisé à l’aide d’une plaque de marque « BD BBL Dryslide » contenant quatre
petits carrés pré-imprégné par un réactif et destiné chacun à tester une colonie bactérienne.
Ecraser, avec une effilure d’une pipette Pasteur, une colonie de germe à étudier sur le petit
carré. S’il y a apparition d’une tache violette au bout de 30 secondes, on pourra conclure que
la bactérie est oxydase + et qu’elle possède la cytochrome oxydase, dans le cas contraire la
bactérie est oxydase – (figure 16).
4.2.2.4.
Le test de la coagulase :
La coagulase est une enzyme capable de faire coaguler le plasma sanguin. La mise en
évidence de la Coagulase dans un bouillon de culture de Staphylococcus est considérée
comme un critère absolu d'identification de Staphylococcus aureus.
Dans un tube à hémolyse stérile, introduire 0,5 mL de plasma oxalaté + 0,5 mL d’une culture
de 18 h en bouillon coeur cervelle de la souche à étudier. Placer le mélange à 37°C. Des
lectures doivent être effectuées toutes les heures au moins pendant les cinq premières heures.
Si le plasma coagule en moins de 24h, le germe possède une coagulase (coagulase +). Sinon
le germe est dit coagulase négative .
52
Le test de catalase :
Cette enzyme catalyse la décomposition du peroxyde d’hydrogène (H 2 O 2 ) qui est produit par
certaines réactions cellulaires et est très toxiques, donc c’est l’une des enzymes chargée
d’éponger l’eau oxygénée par la dismutation (PELMONT, 1993 ; in Aichiou et Echchatabi,
2006). La réaction catalysée est la suivante :
2H 2 O 2
O 2 + 2H 2 O
Sur une lame de verre propre, déposer une goutte de peroxyde d'hydrogène (H 2 O 2 ) puis la
mettre en contact avec une colonie isolée prélevée à l’aide d’une pipette Pasteur. La présence
de catalase se traduit par l’apparition de bulles d’oxygène.
4.2.2.3.
Le test d’oxydase :
C’est un test fondamental pour orienter l’identification des bacilles Gram - . Il met en
évidence la présence dans les bactéries d’une enzyme appelée « la cytochrome oxydase » qui
est capable d’oxyder la forme réduite de dérivés « N-méthylés du paraphénylènediamine » en
semi-quinone caractérisé par une couleur rose violacée.
Ce test est réalisé à l’aide d’une plaque de marque « BD BBL Dryslide » contenant quatre
petits carrés pré-imprégné par un réactif et destiné chacun à tester une colonie bactérienne.
Ecraser, avec une effilure d’une pipette Pasteur, une colonie de germe à étudier sur le petit
carré. S’il y a apparition d’une tache violette au bout de 30 secondes, on pourra conclure que
la bactérie est oxydase + et qu’elle possède la cytochrome oxydase, dans le cas contraire la
bactérie est oxydase – (figure 16).
4.2.2.4.
Le test de la coagulase :
La coagulase est une enzyme capable de faire coaguler le plasma sanguin. La mise en
évidence de la Coagulase dans un bouillon de culture de Staphylococcus est considérée
comme un critère absolu d'identification de Staphylococcus aureus.
Dans un tube à hémolyse stérile, introduire 0,5 mL de plasma oxalaté + 0,5 mL d’une culture
de 18 h en bouillon coeur cervelle de la souche à étudier. Placer le mélange à 37°C. Des
lectures doivent être effectuées toutes les heures au moins pendant les cinq premières heures.
Si le plasma coagule en moins de 24h, le germe possède une coagulase (coagulase +). Sinon
le germe est dit coagulase négative .
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