4.2.1.2.1. Dénombrement des coliformes totaux et fécaux et de la flore
totale:
A partir des dilutions décimales allant de 10
-3 à 10
-1 , porter aseptiquement 1 ml dans une boite
de Pétri vide préparée à cet usage et numérotée. Compléter ensuite avec environ 15 ml de
gélose VBRL (milieu gélosé à base lactose, vert brillant) fondue puis refroidie à 46°C. Le
temps qui s’écoule entre le moment ou l’on a distribué l’inoculum dans la boite et celui ou
le milieu est coulé ne doit pas excéder 15 minutes.
Ensuite, Faire des mouvements circulaires et de va- et -vient en forme de « 8 » pour
permettre à l’inoculum de se mélanger à la gélose, sur une surface fraiche et horizontale.
Laisser solidifier sur paillasse.
Pour les coliformes totaux : Les boites seront incubées couvercle en bas à 35°C (± 2°C)
pendant 24H
Pour les coliformes fécaux : les boites seront incubées couvercle en bas à 44°C (± 0,5°C)
pendant 24H.
Lecture :
Le dénombrement des coliformes se fait à l’aide d’une lampe UV par comptage des colonies
fluorescentes.
Evaluation du nombre de CT :
- retenir les boites de deux dilutions successives donnant une numération comprise entre
15 et 150 colonies.
1,1 : constante
d : première dilution retenue
evaluation du nombre des CF :
- retenir les boites de deux dilutions successives donnant une numération comprise entre
15 et 150 colonies.
- Prendre de chaque boite au minimum 3 colonies jaunes suspectes
- Faire le test de l’urée indole
42
∑
∑ ∑
∑ du nbre des colonies des 2 boites retenues
CT =
1,1 . d
totale:
A partir des dilutions décimales allant de 10
-3 à 10
-1 , porter aseptiquement 1 ml dans une boite
de Pétri vide préparée à cet usage et numérotée. Compléter ensuite avec environ 15 ml de
gélose VBRL (milieu gélosé à base lactose, vert brillant) fondue puis refroidie à 46°C. Le
temps qui s’écoule entre le moment ou l’on a distribué l’inoculum dans la boite et celui ou
le milieu est coulé ne doit pas excéder 15 minutes.
Ensuite, Faire des mouvements circulaires et de va- et -vient en forme de « 8 » pour
permettre à l’inoculum de se mélanger à la gélose, sur une surface fraiche et horizontale.
Laisser solidifier sur paillasse.
Pour les coliformes totaux : Les boites seront incubées couvercle en bas à 35°C (± 2°C)
pendant 24H
Pour les coliformes fécaux : les boites seront incubées couvercle en bas à 44°C (± 0,5°C)
pendant 24H.
Lecture :
Le dénombrement des coliformes se fait à l’aide d’une lampe UV par comptage des colonies
fluorescentes.
Evaluation du nombre de CT :
- retenir les boites de deux dilutions successives donnant une numération comprise entre
15 et 150 colonies.
1,1 : constante
d : première dilution retenue
evaluation du nombre des CF :
- retenir les boites de deux dilutions successives donnant une numération comprise entre
15 et 150 colonies.
- Prendre de chaque boite au minimum 3 colonies jaunes suspectes
- Faire le test de l’urée indole
42
∑
∑ ∑
∑ du nbre des colonies des 2 boites retenues
CT =
1,1 . d