4.2.1.1.3. Dénombrement des germes sulfitoréducteurs :
Répartir les échantillons à analyser dans des tubes à essais stériles, à raison de 5ml
d’échantillon par tube, qui seront par la suite soumis à un chauffage de l’ordre de 80°C
pendant 8 à 10 minutes, dans le but de détruire toutes les formes végétatives des
sulfitoréducteurs éventuellement présentes. Après chauffage, refroidir immédiatement les
tubes en question, sous l’eau de robinet.
Ajouter environ 18 à 20 ml de gélose Viande Foie, fondue puis refroidie à 45 ±1°C,
additionnée d’une ampoule d’Alun de fer et d’une ampoule de Sulfite de sodium.
Mélanger doucement le milieu et l’inoculum en évitant les bulles d’air et en évitant
l’introduction d’oxygène.
Laisser solidifier sur paillasse pendant 30 minutes environ, puis incuber à 37°C, pendant 24 à
48 heures.
La première lecture doit absolument être faite à 16 heures car très souvent les colonies des
SFR sont envahissantes auquel cas on se trouverait en face d’un tube complètement noir
rendant ainsi l’interprétation difficile voire impossible et l’analyse sera à refaire en utilisant
des dilutions décimales de 10
-1 voire 10
-2 , la deuxième lecture se fera à 24 heures et la
troisième et dernière à 48 heures d’incubation. Dénombrer toute colonie noire.
4.2.1.1.4. Recherche et dénombrement des staphylocoques :
Après filtration de la prise d'essai (50 ml), appliquer la membrane sur la gélose Chapman.
Incuber à 37 °C durant 24 heures ou, si besoin est, durant 48 heures. Les souches de
Staphylococcus aureus sont de taille importante et élaborent leur propre pigment; elles
apparaissent en jaune doré, surmontant une zone jaune du milieu sous la membrane (virage du
milieu), par suite de la fermentation du mannitol.
D'autres espèces de staphylocoques peuvent donner naissance à de petites colonies qui le plus
souvent ne se colorent pas et ne modifient pas la teinte du milieu.
Des repiquages sur milieu Chapman sont recommandés jusqu’à l’obtention d’une culture pure
(un seul type de colonies sur toute la boite)
35
Répartir les échantillons à analyser dans des tubes à essais stériles, à raison de 5ml
d’échantillon par tube, qui seront par la suite soumis à un chauffage de l’ordre de 80°C
pendant 8 à 10 minutes, dans le but de détruire toutes les formes végétatives des
sulfitoréducteurs éventuellement présentes. Après chauffage, refroidir immédiatement les
tubes en question, sous l’eau de robinet.
Ajouter environ 18 à 20 ml de gélose Viande Foie, fondue puis refroidie à 45 ±1°C,
additionnée d’une ampoule d’Alun de fer et d’une ampoule de Sulfite de sodium.
Mélanger doucement le milieu et l’inoculum en évitant les bulles d’air et en évitant
l’introduction d’oxygène.
Laisser solidifier sur paillasse pendant 30 minutes environ, puis incuber à 37°C, pendant 24 à
48 heures.
La première lecture doit absolument être faite à 16 heures car très souvent les colonies des
SFR sont envahissantes auquel cas on se trouverait en face d’un tube complètement noir
rendant ainsi l’interprétation difficile voire impossible et l’analyse sera à refaire en utilisant
des dilutions décimales de 10
-1 voire 10
-2 , la deuxième lecture se fera à 24 heures et la
troisième et dernière à 48 heures d’incubation. Dénombrer toute colonie noire.
4.2.1.1.4. Recherche et dénombrement des staphylocoques :
Après filtration de la prise d'essai (50 ml), appliquer la membrane sur la gélose Chapman.
Incuber à 37 °C durant 24 heures ou, si besoin est, durant 48 heures. Les souches de
Staphylococcus aureus sont de taille importante et élaborent leur propre pigment; elles
apparaissent en jaune doré, surmontant une zone jaune du milieu sous la membrane (virage du
milieu), par suite de la fermentation du mannitol.
D'autres espèces de staphylocoques peuvent donner naissance à de petites colonies qui le plus
souvent ne se colorent pas et ne modifient pas la teinte du milieu.
Des repiquages sur milieu Chapman sont recommandés jusqu’à l’obtention d’une culture pure
(un seul type de colonies sur toute la boite)
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