Confirmation et identification :
Les colonies suspectes, ou si elles sont très nombreuses, pourront être confirmées par :
- un examen microscopique après coloration de gram
- La recherche de la catalase et de la coagulase.
- En cas de nécessité, une identification biochimique sur galerie API permettra l'identification
de l'espèce.
4.2.1.1.5. Recherche des germes pathogènes :
a) Recherche des salmonelles :
Pour la recherche et l’identification des salmonelles, on a procédé comme suit :
- Pré enrichissement ou concentration par filtration de 200 ml de l’échantillon d’eau sur
la membrane.
- Enrichissement : mettre la membrane concentrée à l’intérieur d’un flacon contenant le
bouillon d’enrichissement SFB, et incuber à 37°C pendant 24h ;
- A partir du bouillon d’enrichissement, effectuer un isolement sur milieu SS
(Salmonella- Shigella), et incuber à 37°C, pendant 24h.
La présence des salmonelles se traduit soit par des colonies incolores à centre noir ou
bien par des colonies incolores transparentes.
- Procéder à Identification des colonies présumées comme suit :
- Coloration de Gram
- Recherche de l’oxydase
- Compléter par d’autres tests biochimiques à l’aide de la galerie API 20E
b) Recherche des vibrions :
La recherche des vibrions est réalisée comme suit :
- Le premier enrichissement s’effectue sur le milieu Eau Peptonée Alcaline (EPA) 10
fois concentré réparti à raison de 50 ml par flacon auquel on ajoute aseptiquement
450 ml d’eau à analyser au moment du prélèvement. Ce dernier sera par la suite
incubé à 37°C pendant 18 à 24 heures.
- Le lendemain, ce flacon fera l’objet d’un isolement sur deux milieux TCBS
(thiosulfates, citrate, bile, saccharose) et GNAB. L’incubation se fait donc à 37°C
pendant 24 h.
- Le lendemain, les boites de gélose subiront une lecture en tenant compte du fait que
les Vibrions se présentent le plus souvent sous forme de grosses colonies lisses et
transparentes caractéristiques sur GNAB et sous forme de colonies jaunes ou vertes
sans ou avec un centre noir sur TCBS.
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Les colonies suspectes, ou si elles sont très nombreuses, pourront être confirmées par :
- un examen microscopique après coloration de gram
- La recherche de la catalase et de la coagulase.
- En cas de nécessité, une identification biochimique sur galerie API permettra l'identification
de l'espèce.
4.2.1.1.5. Recherche des germes pathogènes :
a) Recherche des salmonelles :
Pour la recherche et l’identification des salmonelles, on a procédé comme suit :
- Pré enrichissement ou concentration par filtration de 200 ml de l’échantillon d’eau sur
la membrane.
- Enrichissement : mettre la membrane concentrée à l’intérieur d’un flacon contenant le
bouillon d’enrichissement SFB, et incuber à 37°C pendant 24h ;
- A partir du bouillon d’enrichissement, effectuer un isolement sur milieu SS
(Salmonella- Shigella), et incuber à 37°C, pendant 24h.
La présence des salmonelles se traduit soit par des colonies incolores à centre noir ou
bien par des colonies incolores transparentes.
- Procéder à Identification des colonies présumées comme suit :
- Coloration de Gram
- Recherche de l’oxydase
- Compléter par d’autres tests biochimiques à l’aide de la galerie API 20E
b) Recherche des vibrions :
La recherche des vibrions est réalisée comme suit :
- Le premier enrichissement s’effectue sur le milieu Eau Peptonée Alcaline (EPA) 10
fois concentré réparti à raison de 50 ml par flacon auquel on ajoute aseptiquement
450 ml d’eau à analyser au moment du prélèvement. Ce dernier sera par la suite
incubé à 37°C pendant 18 à 24 heures.
- Le lendemain, ce flacon fera l’objet d’un isolement sur deux milieux TCBS
(thiosulfates, citrate, bile, saccharose) et GNAB. L’incubation se fait donc à 37°C
pendant 24 h.
- Le lendemain, les boites de gélose subiront une lecture en tenant compte du fait que
les Vibrions se présentent le plus souvent sous forme de grosses colonies lisses et
transparentes caractéristiques sur GNAB et sous forme de colonies jaunes ou vertes
sans ou avec un centre noir sur TCBS.
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