Chapitre III:
Matériel et méthodes.
31
constructeur SKALAR. Cette dernière repose sur la formation de l'acide silicomolybdique, non affectée
par la salinité proposée par Smith et Milne (1981) (in Aminot et Kérouel, 2004).
Sa mesure est basée sur la formation d‟un complexe silicomolybdique par la réaction des silicates avec le
molybdates d‟ammonium en milieu acide. Ce complexe sera par la suite réduit par l‟acide ascorbique en
donnant naissance à un compose colore en bleu absorbant à 810 nm. L‟acide oxalique et ajouté pour évite
les interférences des phosphates.
a) Préparation des réactifs et des standards (voir partie IV de l‟annexe 3)
b) Mode opératoire
o L'appareil doit être allumé pendant une huer avant l'analyse pour la stabilité de l'énergie.
o La cellule du flux dans le trajet optique est de 15 mm ;
o Le filtre monochromatique est à 660 nm ;
o La sensibilité du standard le plus élevé 100 ppb Si est à ±170 A.U.
o Le temps d'échantillonnage est 60 secondes ;
o Le temps de rinçage est de 60 secondes ;
o Le temps de stabilisation du système hydraulique est de l'ordre de 15 minutes.
c) Etalonnage
Une série de six standards est préparé à chaque analyse (quotidiennement). La relation y = 391,4x
est linéaire avec un coefficient de corrélation de R² = 0,998.
Figure 20: Courbe d'étalonnage de la silice (SiO 2
- ).
V.
Dosage de la chlorophylle par la Spectrofluorimétrie ultraviolet (S.F.U.V)
L'étude de la concentration en chlorophylle a du phytoplancton, prise en tant que marqueur de
biomasse, est possible avec l'utilisation de la méthode fluorimétrique de Yenstch Menzel (1963) adapté
par Holm- Hansen et Reimann (1978) pour l‟extraction des pigments à l‟aide du méthanol. La
sensibilité a été considérablement accrue ainsi que le pouvoir de discrimination entre chlorophylle et
phéopigments grâce à l'acidification des extraits (Lemaire, 2002).
La Fluorimétrie est une technique globale d‟évaluation de la pollution organique du milieu marin
a été développée. C‟est une technique d'analyse de la chlorophylle appliquée par Levy (1977) et
préconisée par le C.I.O de l'U.N.E.S.C.O (1977), (Marchand, 1983 et Roussel, 1983, in Bentebbal et
Tichouiti, 1999) et elle a été décrite par Raimbault et al., (1988), (in Raimbault et al., 1992).
V.1. Principe
La SFUV mesure l‟émission de fluorescence de molécules soumises à un rayonnement
d‟excitation ultraviolet. La réponse est fonction de la structure moléculaire et s‟applique aux molécules
possédant des liaisons doubles conjuguées donc à la chlorophylle.
V.2. Appareillage
V.2.1. Dispositif de filtration
La filtration est effectuée sous vide léger en utilisant des filtres en fibre verre (GF/F, 0,45 µm).
y = 391,4x
R² = 0,998
0
500
1000
1500
0
1
2
3
4
Hauteur
du
pic
[SiO2] (µmol/l)
Matériel et méthodes.
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constructeur SKALAR. Cette dernière repose sur la formation de l'acide silicomolybdique, non affectée
par la salinité proposée par Smith et Milne (1981) (in Aminot et Kérouel, 2004).
Sa mesure est basée sur la formation d‟un complexe silicomolybdique par la réaction des silicates avec le
molybdates d‟ammonium en milieu acide. Ce complexe sera par la suite réduit par l‟acide ascorbique en
donnant naissance à un compose colore en bleu absorbant à 810 nm. L‟acide oxalique et ajouté pour évite
les interférences des phosphates.
a) Préparation des réactifs et des standards (voir partie IV de l‟annexe 3)
b) Mode opératoire
o L'appareil doit être allumé pendant une huer avant l'analyse pour la stabilité de l'énergie.
o La cellule du flux dans le trajet optique est de 15 mm ;
o Le filtre monochromatique est à 660 nm ;
o La sensibilité du standard le plus élevé 100 ppb Si est à ±170 A.U.
o Le temps d'échantillonnage est 60 secondes ;
o Le temps de rinçage est de 60 secondes ;
o Le temps de stabilisation du système hydraulique est de l'ordre de 15 minutes.
c) Etalonnage
Une série de six standards est préparé à chaque analyse (quotidiennement). La relation y = 391,4x
est linéaire avec un coefficient de corrélation de R² = 0,998.
Figure 20: Courbe d'étalonnage de la silice (SiO 2
- ).
V.
Dosage de la chlorophylle par la Spectrofluorimétrie ultraviolet (S.F.U.V)
L'étude de la concentration en chlorophylle a du phytoplancton, prise en tant que marqueur de
biomasse, est possible avec l'utilisation de la méthode fluorimétrique de Yenstch Menzel (1963) adapté
par Holm- Hansen et Reimann (1978) pour l‟extraction des pigments à l‟aide du méthanol. La
sensibilité a été considérablement accrue ainsi que le pouvoir de discrimination entre chlorophylle et
phéopigments grâce à l'acidification des extraits (Lemaire, 2002).
La Fluorimétrie est une technique globale d‟évaluation de la pollution organique du milieu marin
a été développée. C‟est une technique d'analyse de la chlorophylle appliquée par Levy (1977) et
préconisée par le C.I.O de l'U.N.E.S.C.O (1977), (Marchand, 1983 et Roussel, 1983, in Bentebbal et
Tichouiti, 1999) et elle a été décrite par Raimbault et al., (1988), (in Raimbault et al., 1992).
V.1. Principe
La SFUV mesure l‟émission de fluorescence de molécules soumises à un rayonnement
d‟excitation ultraviolet. La réponse est fonction de la structure moléculaire et s‟applique aux molécules
possédant des liaisons doubles conjuguées donc à la chlorophylle.
V.2. Appareillage
V.2.1. Dispositif de filtration
La filtration est effectuée sous vide léger en utilisant des filtres en fibre verre (GF/F, 0,45 µm).
y = 391,4x
R² = 0,998
0
500
1000
1500
0
1
2
3
4
Hauteur
du
pic
[SiO2] (µmol/l)