Chapitre III:
Matériel et méthodes.
29
e) Mode opératoire
o Temps de prélèvement de l'échantillon est de 60 secondes ;
o Temps de rinçage est de 60 secondes ;
o Temps de stabilisation du système est de 20 minutes approximativement ;
f) Etalonnage (Figure 16)
Une série de six standards est préparée à chaque analyse (quotidiennement). La courbe
d'étalonnage établie est une droite qui a pour forme y = 480,5 x et un coefficient de corrélation R
2 =
0,998. La loi de Béer Lambert est vérifiée jusqu'à plus de 10 µmole/1.
Figure 16: Courbe d'étalonnage de l'ammonium (NH 4
- ).
IV.2.4. Principe de dosage des Nitrates et Nitrites (NO 3
- et NO 2
-
)
La méthode est basée sur la réduction des nitrates en nitrites par passage de l‟échantillon sur une
colonne de cadmium traité au cuivre (Wood et al., 1967, in Aminot et Kérouel, 2004).
Après cette réduction les nitrites sont dosés selon les conditions réactionnelles décrites par Bendshneider
et Robinson (1952) (in Aminot et Kérouel, 2004). Cette méthode automatisée s'applique à des
concentrations allant 1 à 100 ppb N.
En effet, les nitrites forment un diazoïque par réaction avec la sulfanilamide en milieu acide (pH < 2). Ce
composé formera ensuite, en présence de N-naphtylethylene di-amine, un composé azoïque de couleur
rosée absorbant un maximum de lumière à 540 nm (SKALAR®,1998).
a) Préparation des réactifs et des standards (voir partie II de l‟annexe 3).
b) Activation de la colonne réductrice de Cadmium (Voir partie II.3. de l‟annexe 3).
c) Procédure de remplissage de la colonne
o Des granules de cadmium de Thé sont mélangés au ± la solution d'acide chlorhydrique de 30 ml
(4N) ;
o Remuez approximativement pendant 1 minute ;
o Lavez l'acide libre avec de l'eau distillée ;
o Ajoutez 50 ml de la solution de sulfate de cuivre et remuez pendant 5 minutes jusqu'à la
disparition de la couleur bleue et l'apparition de particules colloïdales rougeâtres ;
o Rincer les grains de cadmium plusieurs fois à l'eau distillée.
o Mettre les grains dans une solution de chlorures d'ammonium à 6,9‰. A partir de cet instant, les
grains ne doivent plus être en contact avec l'air ;
o Remplir soigneusement la colonne avec les grains de cadmium traité à l‟aide d‟un entonnoir et
placez la colonne dans le système.
d) Etalonnage
Deux séries de six standards est préparée à chaque analyse (quotidiennement). Les courbes
d'étalonnage établit ont pour forme :
Pour NO 3
- :
avec R
2 = 0,997 (Figure 17) ;
Pour NO 2
- :
avec R
2 = 0,995 (Figure 18) ;
En général, la loi de Béer Lambert est vérifiée jusqu'à 35 µmole/1 (Boulahdid, 1987 in Guellati, 2003).
y = 480,5x
R² = 0,998
0
400
800
1200
1600
2000
0
1
2
3
4
5
Hauteur
du
pic
[NH4] (µmol/l)
Matériel et méthodes.
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e) Mode opératoire
o Temps de prélèvement de l'échantillon est de 60 secondes ;
o Temps de rinçage est de 60 secondes ;
o Temps de stabilisation du système est de 20 minutes approximativement ;
f) Etalonnage (Figure 16)
Une série de six standards est préparée à chaque analyse (quotidiennement). La courbe
d'étalonnage établie est une droite qui a pour forme y = 480,5 x et un coefficient de corrélation R
2 =
0,998. La loi de Béer Lambert est vérifiée jusqu'à plus de 10 µmole/1.
Figure 16: Courbe d'étalonnage de l'ammonium (NH 4
- ).
IV.2.4. Principe de dosage des Nitrates et Nitrites (NO 3
- et NO 2
-
)
La méthode est basée sur la réduction des nitrates en nitrites par passage de l‟échantillon sur une
colonne de cadmium traité au cuivre (Wood et al., 1967, in Aminot et Kérouel, 2004).
Après cette réduction les nitrites sont dosés selon les conditions réactionnelles décrites par Bendshneider
et Robinson (1952) (in Aminot et Kérouel, 2004). Cette méthode automatisée s'applique à des
concentrations allant 1 à 100 ppb N.
En effet, les nitrites forment un diazoïque par réaction avec la sulfanilamide en milieu acide (pH < 2). Ce
composé formera ensuite, en présence de N-naphtylethylene di-amine, un composé azoïque de couleur
rosée absorbant un maximum de lumière à 540 nm (SKALAR®,1998).
a) Préparation des réactifs et des standards (voir partie II de l‟annexe 3).
b) Activation de la colonne réductrice de Cadmium (Voir partie II.3. de l‟annexe 3).
c) Procédure de remplissage de la colonne
o Des granules de cadmium de Thé sont mélangés au ± la solution d'acide chlorhydrique de 30 ml
(4N) ;
o Remuez approximativement pendant 1 minute ;
o Lavez l'acide libre avec de l'eau distillée ;
o Ajoutez 50 ml de la solution de sulfate de cuivre et remuez pendant 5 minutes jusqu'à la
disparition de la couleur bleue et l'apparition de particules colloïdales rougeâtres ;
o Rincer les grains de cadmium plusieurs fois à l'eau distillée.
o Mettre les grains dans une solution de chlorures d'ammonium à 6,9‰. A partir de cet instant, les
grains ne doivent plus être en contact avec l'air ;
o Remplir soigneusement la colonne avec les grains de cadmium traité à l‟aide d‟un entonnoir et
placez la colonne dans le système.
d) Etalonnage
Deux séries de six standards est préparée à chaque analyse (quotidiennement). Les courbes
d'étalonnage établit ont pour forme :
Pour NO 3
- :
avec R
2 = 0,997 (Figure 17) ;
Pour NO 2
- :
avec R
2 = 0,995 (Figure 18) ;
En général, la loi de Béer Lambert est vérifiée jusqu'à 35 µmole/1 (Boulahdid, 1987 in Guellati, 2003).
y = 480,5x
R² = 0,998
0
400
800
1200
1600
2000
0
1
2
3
4
5
Hauteur
du
pic
[NH4] (µmol/l)