Chapitre III:
Matériel et méthodes.
28
Loi de Beer-Lambet
L‟absorption et la transmission sont deux phénomènes auxquels est soumise une substance
d‟épaisseur (L) traversée par un faisceau lumineux monochromatique. Les quantités de lumières
absorbées (Absorbance) et transmise (transmission) obéissent à la loi de Beer-Lambert.
Où :
I 0 , I : est l‟‟intensité lumineuse incidente et émergente du milieu absorbant ;
A : est l‟absorbance ou densité optique ;
ε: est le coefficient d‟extinction moléculaire ;
L : est le trajet optique (épaisseur du milieu absorbant) ;
C : est la concentration du milieu absorbant.
IV.1.2. Matériel utilisé
o Auto-analyzer SAN plus System de marque SKALAR®, 1998;
o Bi-distillateur MILLI-Q® Reagent Water System ;
o Des micropipettes Fortuna ® avec éjecteur d‟embouts de type DIGITAL , une de 200 à 1000 µl et
l‟autre de 20 à 250 µl, ainsi que des fioles de 100 et 500 ml ;
o Balance, Spatule, entonnoir et bécher et la hote.
IV.2. Dosage chimique des sels nutritifs
IV.2.1. Principe général
Le principe de dosage des sels nutritifs est basé sur une réaction de coloration. En effet ces sels
réagissent dans certaines conditions (T°C, pH, Catalyseur …) avec des réactifs spécifiques pour donner
naissance à une coloration absorbant la lumière à une certaine longueur d‟ondes (λ).
L‟absorption de l‟énergie lumineuse dépend de l‟intensité de la coloration, de même cette
dernière est de temps plus importante que la solution est concentrée en sel dosé.
IV.2.2. Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation pour chacun des éléments à analyser une solution mère et
une solution fille (voir après).
Pour chacune de ces solutions filles, on réalise une série de six étalons couvrant la gamme de la
concentration des échantillons rencontrée habituellement dans l‟eau de mer (Tableau 1 dans l’annexe 2).
Les droites d‟étalonnage sont établies automatiquement par le logiciel en utilisant les concentrations
connus des solutions étalons et leurs hauteurs de pic correspondantes.
L‟eau bi-distillée et les réactifs sont pris comme référence pour la construction de ligne de base.
IV.2.3. Principe de dosage de l’Azote ammoniacal (NH 4
+
)
Le constructeur SKALAR a adapté la procédure automatisé par Thé pour la détermination de
l‟ammonium pour l‟analyse de l‟eau de mer, qui est basé sur la réaction de Berthelot (1859) modifiée par
Thé. Elle s'applique à des concentrations allant de 2 à 100 ppb N.
En milieu alcalin (8 < pH < 11,5), l'ammonium dissous réagit sur l‟hypochlorite pour former une
monochloramine. Ce composé, en présence de phénol et d‟un excès d‟hypochlorite (milieu oxydant)
donne lien à la formation d‟un bleu indophénol. Après oxydation un composé coloré vert est formé. La
réaction de Thé est catalysée par le nitroprusside de sodium. Le composé formé dans un maximum
d‟absorption qui se fait à une longueur d‟onde de 630 nm (SKALAR® 1998).
d) Les réactifs et les standards
Pour la préparation des réactifs et des standards c‟est faite selon le protocole du producteur SKALAR ®,
1998 (voir la partie I de l‟annexe 3).
A = Ln I 0 / I = ε.L.C
Matériel et méthodes.
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Loi de Beer-Lambet
L‟absorption et la transmission sont deux phénomènes auxquels est soumise une substance
d‟épaisseur (L) traversée par un faisceau lumineux monochromatique. Les quantités de lumières
absorbées (Absorbance) et transmise (transmission) obéissent à la loi de Beer-Lambert.
Où :
I 0 , I : est l‟‟intensité lumineuse incidente et émergente du milieu absorbant ;
A : est l‟absorbance ou densité optique ;
ε: est le coefficient d‟extinction moléculaire ;
L : est le trajet optique (épaisseur du milieu absorbant) ;
C : est la concentration du milieu absorbant.
IV.1.2. Matériel utilisé
o Auto-analyzer SAN plus System de marque SKALAR®, 1998;
o Bi-distillateur MILLI-Q® Reagent Water System ;
o Des micropipettes Fortuna ® avec éjecteur d‟embouts de type DIGITAL , une de 200 à 1000 µl et
l‟autre de 20 à 250 µl, ainsi que des fioles de 100 et 500 ml ;
o Balance, Spatule, entonnoir et bécher et la hote.
IV.2. Dosage chimique des sels nutritifs
IV.2.1. Principe général
Le principe de dosage des sels nutritifs est basé sur une réaction de coloration. En effet ces sels
réagissent dans certaines conditions (T°C, pH, Catalyseur …) avec des réactifs spécifiques pour donner
naissance à une coloration absorbant la lumière à une certaine longueur d‟ondes (λ).
L‟absorption de l‟énergie lumineuse dépend de l‟intensité de la coloration, de même cette
dernière est de temps plus importante que la solution est concentrée en sel dosé.
IV.2.2. Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation pour chacun des éléments à analyser une solution mère et
une solution fille (voir après).
Pour chacune de ces solutions filles, on réalise une série de six étalons couvrant la gamme de la
concentration des échantillons rencontrée habituellement dans l‟eau de mer (Tableau 1 dans l’annexe 2).
Les droites d‟étalonnage sont établies automatiquement par le logiciel en utilisant les concentrations
connus des solutions étalons et leurs hauteurs de pic correspondantes.
L‟eau bi-distillée et les réactifs sont pris comme référence pour la construction de ligne de base.
IV.2.3. Principe de dosage de l’Azote ammoniacal (NH 4
+
)
Le constructeur SKALAR a adapté la procédure automatisé par Thé pour la détermination de
l‟ammonium pour l‟analyse de l‟eau de mer, qui est basé sur la réaction de Berthelot (1859) modifiée par
Thé. Elle s'applique à des concentrations allant de 2 à 100 ppb N.
En milieu alcalin (8 < pH < 11,5), l'ammonium dissous réagit sur l‟hypochlorite pour former une
monochloramine. Ce composé, en présence de phénol et d‟un excès d‟hypochlorite (milieu oxydant)
donne lien à la formation d‟un bleu indophénol. Après oxydation un composé coloré vert est formé. La
réaction de Thé est catalysée par le nitroprusside de sodium. Le composé formé dans un maximum
d‟absorption qui se fait à une longueur d‟onde de 630 nm (SKALAR® 1998).
d) Les réactifs et les standards
Pour la préparation des réactifs et des standards c‟est faite selon le protocole du producteur SKALAR ®,
1998 (voir la partie I de l‟annexe 3).
A = Ln I 0 / I = ε.L.C