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II.3.1.2.Principe
La détermination des protéines par la méthode Kjeldahl s’effectue en trois étapes:
Étape 1: Digestion ou minéralisation de l’échantillon
Pendant l’étape de la digestion, l’azote protéique est transformé en azote
ammoniacal par oxydation de la matière organique dans l’acide sulfurique concentré
à haute température, en présence d’un catalyseur et d’un sel :
− l’acide sulfurique concentré a pour but d’oxyder la matière organique et de
transformer l’azote protéique en ammoniac (NH 3 ). Il sert également à
piéger l’ammoniac gazeux sous la forme de sulfate d’ammonium, par action
de la base avec l’acide.
− l’addition du sel de sulfate de potassium (K2SO4) à pour but d’élever le point
d’ébullition de la solution pour accélérer la réaction de minéralisation de la
matière organique.
− le catalyseur utilisé est le sélénium (Se).
La réaction chimique est la suivante :
H 2 SO 4 + N (aliment) → SO 4
-- (NH 4 ) 2
+
Étape 2: Distillation de l’ammoniac
Avant de distiller l’ammoniac à la vapeur d’eau, on doit libérer l’ammoniac sous
la forme du sel (NH 4 ) 2 SO 4 par l’addition d’une solution concentrée de NaOH en
excès. La transformation chimique se fait comme suit :
SO 4 (NH 4 ) 2 + 2NaOH→ SO 4 Na 2 + 2NH 4 OH
L’ammoniac est ensuite distillé par la vapeur d’eau et piégée dans une solution
d’acide borique. L’ammoniac réagit avec l’acide borique pour former des sels
borates d’ammonium. La transformation chimique se fait comme suit :
NH 4 OH + H 3 BO 3 → BO 3 H 2 NH 4 + H 2 O
(Sel borate d’ammonium)
Étape 3 : Titrage de l’ammoniac
L’ammoniac sous la forme de borates d’ammonium est titré directement à l’aide
d’une solution standardisée d’acide chlorhydrique HCl et d’un indicateur (le
Tashiro) :
BO 3 H 2 NH 4 + HCl → NH 4 Cl + H 3 BO 3
II.3.1.2.Principe
La détermination des protéines par la méthode Kjeldahl s’effectue en trois étapes:
Étape 1: Digestion ou minéralisation de l’échantillon
Pendant l’étape de la digestion, l’azote protéique est transformé en azote
ammoniacal par oxydation de la matière organique dans l’acide sulfurique concentré
à haute température, en présence d’un catalyseur et d’un sel :
− l’acide sulfurique concentré a pour but d’oxyder la matière organique et de
transformer l’azote protéique en ammoniac (NH 3 ). Il sert également à
piéger l’ammoniac gazeux sous la forme de sulfate d’ammonium, par action
de la base avec l’acide.
− l’addition du sel de sulfate de potassium (K2SO4) à pour but d’élever le point
d’ébullition de la solution pour accélérer la réaction de minéralisation de la
matière organique.
− le catalyseur utilisé est le sélénium (Se).
La réaction chimique est la suivante :
H 2 SO 4 + N (aliment) → SO 4
-- (NH 4 ) 2
+
Étape 2: Distillation de l’ammoniac
Avant de distiller l’ammoniac à la vapeur d’eau, on doit libérer l’ammoniac sous
la forme du sel (NH 4 ) 2 SO 4 par l’addition d’une solution concentrée de NaOH en
excès. La transformation chimique se fait comme suit :
SO 4 (NH 4 ) 2 + 2NaOH→ SO 4 Na 2 + 2NH 4 OH
L’ammoniac est ensuite distillé par la vapeur d’eau et piégée dans une solution
d’acide borique. L’ammoniac réagit avec l’acide borique pour former des sels
borates d’ammonium. La transformation chimique se fait comme suit :
NH 4 OH + H 3 BO 3 → BO 3 H 2 NH 4 + H 2 O
(Sel borate d’ammonium)
Étape 3 : Titrage de l’ammoniac
L’ammoniac sous la forme de borates d’ammonium est titré directement à l’aide
d’une solution standardisée d’acide chlorhydrique HCl et d’un indicateur (le
Tashiro) :
BO 3 H 2 NH 4 + HCl → NH 4 Cl + H 3 BO 3