Chapitre 2
Matériels & Méthodes
67
Le quadrillage de la membrane facilite le dénombrement des colonies que les bactéries
forment après incubation dans des milieux de culture spécifiques.
B- Matériel :
Dispositif de filtration de marque « Sartorius Stedim » ;
Bec-Bunsen pour garder tout au long de la manipulation la zone de travail stérile ;
Boites de Pétri avec les milieux de culture spécifiques pour chaque germe ;
Membranes d’ester de cellulose, filtrantes, quadrillées et stériles (en emballage individuel)
de marque « Millipore », de porosité : 0,45µm et de diamètre : 47 mm, susceptibles
de retenir les bactéries ;
Deux Incubateurs (Étuves) ;
Pompe à vide ;
Pinces stérilisées et Pipettes.
C- Procédure : voir figure 2.27
2.3.2.7.3. Recherche et dénombrement des coliformes
Les coliformes sont des bâtonnets, anaérobies facultatifs, gram (-) non sporulants
permettant l’hydrolyse du lactose à 35°C (OMS, 1979) avec dégagement de gaz. Les
coliformes regroupent les genres Echerichia, Citrobacter, Entérobacter, Klébsiella, Yersinia,
Serratia (RODIER et al., 1996 ; JOLY et REYNAUD, 2003).
La recherche et le dénombrement de l’ensemble des coliformes (coliformes totaux),
sans préjuger de leur appartenance taxonomique et de leur origine, est capital pour
la vérification de l’efficacité d’un traitement désinfectant et est d’un intérêt nuancé pour
déceler une contamination d’origine fécale (RODIER et al., 1996). La recherche
et le dénombrement des coliformes thermotolérants est un examen proposé en raison d’une
concordance statistique entre leur présence et l’existence d’une contamination fécale quasi
certaine (RODIER et al., 1996). Escherichia coli est le type de coliformes d’habitat fécal
exclusif ; sa recherche est donc extrêmement importante.
A- Principe :
Après ensemencement et incubation, l’aspect du milieu de culture est modifié par
les germes (E. coli ou coliformes thermotolérants) dont la présence est ensuite confirmée
et le nombre précisé.
B- Mode opératoire :
Après filtration d’un volume de 100ml d'échantillon, la membrane filtrante quadrillée
est déposée sur un milieu gélosé sélectif Tergitol. L'opération est répétée deux fois. L'une des
boites est incubée à 37°C pendant 24h pour la recherche des coliformes totaux, et l'autre à
44°C pour la recherche des coliformes thermotolérants.
Les colonies de coliformes sont identifiées par leur coloration laquelle est précisée
dans la figure. Le nombre de colonies trouvées est exprimé en Unité Formant Colonie dans
100 ml d’eau analysée (UFC/100ml).
Matériels & Méthodes
67
Le quadrillage de la membrane facilite le dénombrement des colonies que les bactéries
forment après incubation dans des milieux de culture spécifiques.
B- Matériel :
Dispositif de filtration de marque « Sartorius Stedim » ;
Bec-Bunsen pour garder tout au long de la manipulation la zone de travail stérile ;
Boites de Pétri avec les milieux de culture spécifiques pour chaque germe ;
Membranes d’ester de cellulose, filtrantes, quadrillées et stériles (en emballage individuel)
de marque « Millipore », de porosité : 0,45µm et de diamètre : 47 mm, susceptibles
de retenir les bactéries ;
Deux Incubateurs (Étuves) ;
Pompe à vide ;
Pinces stérilisées et Pipettes.
C- Procédure : voir figure 2.27
2.3.2.7.3. Recherche et dénombrement des coliformes
Les coliformes sont des bâtonnets, anaérobies facultatifs, gram (-) non sporulants
permettant l’hydrolyse du lactose à 35°C (OMS, 1979) avec dégagement de gaz. Les
coliformes regroupent les genres Echerichia, Citrobacter, Entérobacter, Klébsiella, Yersinia,
Serratia (RODIER et al., 1996 ; JOLY et REYNAUD, 2003).
La recherche et le dénombrement de l’ensemble des coliformes (coliformes totaux),
sans préjuger de leur appartenance taxonomique et de leur origine, est capital pour
la vérification de l’efficacité d’un traitement désinfectant et est d’un intérêt nuancé pour
déceler une contamination d’origine fécale (RODIER et al., 1996). La recherche
et le dénombrement des coliformes thermotolérants est un examen proposé en raison d’une
concordance statistique entre leur présence et l’existence d’une contamination fécale quasi
certaine (RODIER et al., 1996). Escherichia coli est le type de coliformes d’habitat fécal
exclusif ; sa recherche est donc extrêmement importante.
A- Principe :
Après ensemencement et incubation, l’aspect du milieu de culture est modifié par
les germes (E. coli ou coliformes thermotolérants) dont la présence est ensuite confirmée
et le nombre précisé.
B- Mode opératoire :
Après filtration d’un volume de 100ml d'échantillon, la membrane filtrante quadrillée
est déposée sur un milieu gélosé sélectif Tergitol. L'opération est répétée deux fois. L'une des
boites est incubée à 37°C pendant 24h pour la recherche des coliformes totaux, et l'autre à
44°C pour la recherche des coliformes thermotolérants.
Les colonies de coliformes sont identifiées par leur coloration laquelle est précisée
dans la figure. Le nombre de colonies trouvées est exprimé en Unité Formant Colonie dans
100 ml d’eau analysée (UFC/100ml).