Chapitre 2
Matériels & Méthodes
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Figure 2.27 : Procédure filtration sur membrane pour la recherche et le dénombrement
de bactéries dans l’eau de mer
Nettoyage de l’espace de travail (paillasse) à l’eau de Javel devant un Bec-Bunsen
Verser dans chaque entonnoir un volume 100 ml
de d’échantillon bien homogénéisé
Faire le vide jusqu’à filtration totale de l’échantillon
Retirer l’entonnoir et déposer la membrane filtrante à l’aide d’une pince
stérile sur un milieu adapté aux bactéries recherchées
Déposer la membrane en la déroulant pour tenir un contact étroit avec la
gélose (la présence de bulles d’air est signalée par des taches blanches)
Membrane filtrante stérile près du bord à l’aide d’une pince stérilisée
Lavage et stérilisation de l’équipement de filtration par flambage
Placer l’entonnoir sur le support et le fixer fermement
Mise en place de la pompe à vide
Inscrire sur la boite de Pétri le numéro de l’échantillon et le volume filtré
Placer les boites de Pétri en position inverse et les incuber à une température
donnée pendant une durée spécifique pour chaque germe
Flambage du dispositif par le Bec-Bunsen après chaque échantillon
filtré, afin d’éviter toute contamination possible
Identification et dénombrement des germes recherchés après incubation