Chapitre 2
Matériels & Méthodes
66
2.3.2.7. ANALYSE MICROBIOLOGIQUE
Au laboratoire, l’objectif est de mettre en évidence la présence de pollution bactérienne
d’origine humaine qui concerne la recherche et le dénombrement des germes révélateur de
contamination fécale, qui selon FIGARELLA et al., 2001 entraînent par leur abondance, la
présomption d’une contamination plus dangereuse. Ce sont les conformes totaux, les
conformes fécaux, Escherichia coli et les streptocoques fécaux. La recherche et
l’identification des staphylocoques, des vibrions et des salmonelles est aussi entreprise dans le
cadre de cette étude. L’estimation de la charge bactérienne dans la baie est effectuée par la
méthode de filtration sur membrane.
2.3.2.7.1. Prélèvement
Un examen bactériologique ne peut être valablement interprété que s’il est effectué sur
un échantillon correctement prélevé. Le prélèvement des échantillons s’est effectué
en surface, au niveau des stations décrites précédemment. Les échantillons d’eau ont été
recueillis dans des flacons de verre de 500ml stérilisés (140°C), puis bouchés
et soigneusement étiquetés. Si certaines précautions ne sont pas prisées, la teneur initiale
en germes des eaux risque de subir des modifications dans le flacon après prélèvement.
L’évaluation est d’ailleurs assez difficile à prévoir et dépend de nombreux facteurs :
température, concurrence bactérienne des espèces présentes, composition chimique de l’eau.
C’est pour cela que les échantillons ont été transportés dans des glacières dont la température
est comprise entre 4 et 6°C afin de les protéger de la lumière du soleil et de la chaleur
jusqu’au moment de l’analyse, 24 après (AMINOT et CHAUSSEPIED, 1983).
2.3.2.7.2. Dénombrement par la technique de filtration sur membrane
A- Principe :
La technique de filtration sur membrane est la méthode de concentration la plus utilisée
au laboratoire pour sa facilité et sa reproductibilité. Elle consiste à recueillir, à identifier et à
énumérer à la surface d’une membrane filtrante stérile de porosité 0,45µm les bactéries
recherchées dans un échantillon d’eau.
Figure 2.25 : Droite d’étalonnage
des orthophosphates
y = 472.66x - 4.75
R² = 0.9998
0
100
200
300
400
500
600
700
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4
A
b
o
n
d
a
n
c
e
[ P O 4
3 - ] ( µ m o l / l )
Figure 2.26 : Droite d’étalonnage
du silicium dissout
y = 77.117x + 4.5761
R² = 0.9996
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
0
1
2
3
4
5
A
b
o
n
d
a
n
c
e
[ S i O 2 ] ( µ m o l / l )
Matériels & Méthodes
66
2.3.2.7. ANALYSE MICROBIOLOGIQUE
Au laboratoire, l’objectif est de mettre en évidence la présence de pollution bactérienne
d’origine humaine qui concerne la recherche et le dénombrement des germes révélateur de
contamination fécale, qui selon FIGARELLA et al., 2001 entraînent par leur abondance, la
présomption d’une contamination plus dangereuse. Ce sont les conformes totaux, les
conformes fécaux, Escherichia coli et les streptocoques fécaux. La recherche et
l’identification des staphylocoques, des vibrions et des salmonelles est aussi entreprise dans le
cadre de cette étude. L’estimation de la charge bactérienne dans la baie est effectuée par la
méthode de filtration sur membrane.
2.3.2.7.1. Prélèvement
Un examen bactériologique ne peut être valablement interprété que s’il est effectué sur
un échantillon correctement prélevé. Le prélèvement des échantillons s’est effectué
en surface, au niveau des stations décrites précédemment. Les échantillons d’eau ont été
recueillis dans des flacons de verre de 500ml stérilisés (140°C), puis bouchés
et soigneusement étiquetés. Si certaines précautions ne sont pas prisées, la teneur initiale
en germes des eaux risque de subir des modifications dans le flacon après prélèvement.
L’évaluation est d’ailleurs assez difficile à prévoir et dépend de nombreux facteurs :
température, concurrence bactérienne des espèces présentes, composition chimique de l’eau.
C’est pour cela que les échantillons ont été transportés dans des glacières dont la température
est comprise entre 4 et 6°C afin de les protéger de la lumière du soleil et de la chaleur
jusqu’au moment de l’analyse, 24 après (AMINOT et CHAUSSEPIED, 1983).
2.3.2.7.2. Dénombrement par la technique de filtration sur membrane
A- Principe :
La technique de filtration sur membrane est la méthode de concentration la plus utilisée
au laboratoire pour sa facilité et sa reproductibilité. Elle consiste à recueillir, à identifier et à
énumérer à la surface d’une membrane filtrante stérile de porosité 0,45µm les bactéries
recherchées dans un échantillon d’eau.
Figure 2.25 : Droite d’étalonnage
des orthophosphates
y = 472.66x - 4.75
R² = 0.9998
0
100
200
300
400
500
600
700
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4
A
b
o
n
d
a
n
c
e
[ P O 4
3 - ] ( µ m o l / l )
Figure 2.26 : Droite d’étalonnage
du silicium dissout
y = 77.117x + 4.5761
R² = 0.9996
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
0
1
2
3
4
5
A
b
o
n
d
a
n
c
e
[ S i O 2 ] ( µ m o l / l )