Chapitre 2
Matériels & Méthodes
84
Figure 2.37 : Test de la catalase
La technique est la suivante : sur une lame de verre propre, déposer une goutte de H2O2, puis
la mettre en contact avec une colonie isolée, prélevée directement avec une pipette pasteur
boutonnée ou une anse plastique à usage unique. Il ne faut pas utiliser une anse en métal car
elle serait alors oxydante :
Si il y a une formation de bulles, la bactérie possède la catalase ;
Si rien n'est observable, la bactérie ne possède pas l'enzyme.
C- Test d’oxydase :
L’oxydase est une enzyme catalysant une réaction d'oxydo-réduction impliquant une
molécule de dioxygène (O2) comme accepteur d'électron. Dans ces réactions, l'oxygène est
réduit en eau (H2O) ou en peroxyde d'hydrogène (H2O2).
On dit qu'une bactérie est oxydase + si un fragment de culture est capable d'oxyder la
forme réduite de dérivés N-méthylés du paraphénylènediamine en semi-quinone (de couleur
violacée). La présence d'oxydase serait liée à celle dans la chaîne respiratoire du complexe
enzymatique IV : cytochrome c oxydase.
Le test de l’oxydase est une procédure qualitative permettant de déterminer la présence
ou l’absence de l’activité du cytochrome c oxydase dans les bactéries. L’activité dépend de la
présence d’un système intracellulaire de cytochrome oxydase qui catalyse l’oxydation du
cytochrome c par l’oxygène moléculaire, lequel sert alors d’accepteur terminal d’électrons
dans le système de transport des électrons de l’organisme.
Les organismes contenant du cytochrome c dans leur chaîne respiratoire sont positifs
pour l’oxydase et font virer le réactif au violet ; les organismes sans cytochrome c dans leur
chaîne respiratoire n’oxyde pas le réactif, le laissant incolore dans l’intervalle de temps
imparti au test et sont négatifs pour l’oxydase.
Ce test est réalisé à l’aide d’un test rapide avec la lame « BD BBL™ DrySlide™
Oxidase ». C’est une lame jetable présentant quatre zones de réaction à papier filtre imprégné
du dihydrochlorure de N,N,N’,N’- tétraméthyl-p-phénylènediamine et de l’acide ascorbique,
un agent réducteur et un stabilisant.
La technique préconisée par le fabricant de la lame est la suivante : à l’aide d’une anse à
inoculation (en platine ou en plastique) ou une pipette pasteur boutonnée, prélever les
colonies isolées et les inoculer directement sur la zone de réaction de la lame BD BBL™
DrySlide™ Oxidase. Chaque zone de réaction permet jusqu’à 4 tests. Pour assurer une
réaction appropriée, étaler l’inoculum sur la zone de réaction de la lame jusqu’à 3 – 4 mm.
Examiner la zone de réaction pour observer le virement de la coloration au violet foncé dans
les 20 s. Toute coloration postérieure aux 20 s doit être jetée.
Matériels & Méthodes
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Figure 2.37 : Test de la catalase
La technique est la suivante : sur une lame de verre propre, déposer une goutte de H2O2, puis
la mettre en contact avec une colonie isolée, prélevée directement avec une pipette pasteur
boutonnée ou une anse plastique à usage unique. Il ne faut pas utiliser une anse en métal car
elle serait alors oxydante :
Si il y a une formation de bulles, la bactérie possède la catalase ;
Si rien n'est observable, la bactérie ne possède pas l'enzyme.
C- Test d’oxydase :
L’oxydase est une enzyme catalysant une réaction d'oxydo-réduction impliquant une
molécule de dioxygène (O2) comme accepteur d'électron. Dans ces réactions, l'oxygène est
réduit en eau (H2O) ou en peroxyde d'hydrogène (H2O2).
On dit qu'une bactérie est oxydase + si un fragment de culture est capable d'oxyder la
forme réduite de dérivés N-méthylés du paraphénylènediamine en semi-quinone (de couleur
violacée). La présence d'oxydase serait liée à celle dans la chaîne respiratoire du complexe
enzymatique IV : cytochrome c oxydase.
Le test de l’oxydase est une procédure qualitative permettant de déterminer la présence
ou l’absence de l’activité du cytochrome c oxydase dans les bactéries. L’activité dépend de la
présence d’un système intracellulaire de cytochrome oxydase qui catalyse l’oxydation du
cytochrome c par l’oxygène moléculaire, lequel sert alors d’accepteur terminal d’électrons
dans le système de transport des électrons de l’organisme.
Les organismes contenant du cytochrome c dans leur chaîne respiratoire sont positifs
pour l’oxydase et font virer le réactif au violet ; les organismes sans cytochrome c dans leur
chaîne respiratoire n’oxyde pas le réactif, le laissant incolore dans l’intervalle de temps
imparti au test et sont négatifs pour l’oxydase.
Ce test est réalisé à l’aide d’un test rapide avec la lame « BD BBL™ DrySlide™
Oxidase ». C’est une lame jetable présentant quatre zones de réaction à papier filtre imprégné
du dihydrochlorure de N,N,N’,N’- tétraméthyl-p-phénylènediamine et de l’acide ascorbique,
un agent réducteur et un stabilisant.
La technique préconisée par le fabricant de la lame est la suivante : à l’aide d’une anse à
inoculation (en platine ou en plastique) ou une pipette pasteur boutonnée, prélever les
colonies isolées et les inoculer directement sur la zone de réaction de la lame BD BBL™
DrySlide™ Oxidase. Chaque zone de réaction permet jusqu’à 4 tests. Pour assurer une
réaction appropriée, étaler l’inoculum sur la zone de réaction de la lame jusqu’à 3 – 4 mm.
Examiner la zone de réaction pour observer le virement de la coloration au violet foncé dans
les 20 s. Toute coloration postérieure aux 20 s doit être jetée.