Chapitre 2
Matériels & Méthodes
85
Les organismes positifs pour l’oxydase donnent une coloration violette ou sombre
dans les 20 s ;
Les organismes négatifs pour l’oxydase ne produisent aucun changement de coloration
ou seulement un virement au gris clair dans les 20 sec imparties au test ;
Il n’est pas possible de tenir compte du changement de couleur après 20 s.
Figure 2.38 : Test rapide d’Oxydase sur lame BD BBL™ DrySlide™ Oxidase
D- Isolement et Identification par la galerie API 20E
L'isolement est une technique qui nécessite des milieux gélosés, contenant de nombreux
facteurs de croissance et parfois des inhibiteurs les rendent sélectifs. Il permet la séparation
des bactéries d'un mélange poly microbien et l'obtention de colonies d'espèces différentes
espacées les unes des autres ;
L'identification biochimique des bactéries se fait à l'aide de galeries API 20 qui
effectuent 21 tests biochimiques simultanés et miniaturisés : étude de la fermentation de
divers glucides et recherche directe d'une enzyme. Chaque microtubule d’une galerie (voir
figure) contient un substrat différent sous forme déshydratée et sur lequel le micro-organisme
considéré va réagir. Ils sont remplis d'une suspension bactérienne calibrée. Les réactions
produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanées ou
révélés par l’addition de réactifs. La lecture de ces réactions se fait à l’aide d’un tableau de
lecture (tableau 2.6) et l’identification est obtenue à l’aide d’un catalogue analytique ou un
logiciel d’identification.
La première galerie API apparue dans le monde de la microbiologie a été la galerie
Api 20 E destinée à l'identification des entérobactéries dont les coliformes et salmonelles.
Différentes galeries API existent pour l’identification d’autres germes, à titre d’exemple :
API 20 STREP pour les streptocoques, API 20 STAPH pour les staphylocoques, API 20 A
pour les anaérobies dont. L’API 20 E peut être utilisée pour l’identification des nonentérobactéries (Vibrio, Pseudomonas).
La technique est la suivante : partir d'une boite de pétri contenant une culture pure (un seul
type de bactérie), une suspension dans de l'eau distillée stérile est préparée. Avec cette
solution bien homogénéisée, on remplit les galeries en respectant le mode d'emploi (voir
figure ci-après). Les galeries sont incubées à 37°C pendant 24 heures. Après incubation, la
lecture de la galerie doit se faire en se référant au tableau de lecture. Les tests sont regroupés
en groupe de 3, et une valeur (1, 2 ou4) est indiquée pour chacun. Additionner à l’intérieur de
chaque groupe les nombres correspondants aux tests positifs. On obtient un nombre de 7
chiffres qui sert de code d’identification. Se référer en suite au catalogue API pour Identifier
la souche d’après ce code.
Oxydase -
Oxydase +
Matériels & Méthodes
85
Les organismes positifs pour l’oxydase donnent une coloration violette ou sombre
dans les 20 s ;
Les organismes négatifs pour l’oxydase ne produisent aucun changement de coloration
ou seulement un virement au gris clair dans les 20 sec imparties au test ;
Il n’est pas possible de tenir compte du changement de couleur après 20 s.
Figure 2.38 : Test rapide d’Oxydase sur lame BD BBL™ DrySlide™ Oxidase
D- Isolement et Identification par la galerie API 20E
L'isolement est une technique qui nécessite des milieux gélosés, contenant de nombreux
facteurs de croissance et parfois des inhibiteurs les rendent sélectifs. Il permet la séparation
des bactéries d'un mélange poly microbien et l'obtention de colonies d'espèces différentes
espacées les unes des autres ;
L'identification biochimique des bactéries se fait à l'aide de galeries API 20 qui
effectuent 21 tests biochimiques simultanés et miniaturisés : étude de la fermentation de
divers glucides et recherche directe d'une enzyme. Chaque microtubule d’une galerie (voir
figure) contient un substrat différent sous forme déshydratée et sur lequel le micro-organisme
considéré va réagir. Ils sont remplis d'une suspension bactérienne calibrée. Les réactions
produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanées ou
révélés par l’addition de réactifs. La lecture de ces réactions se fait à l’aide d’un tableau de
lecture (tableau 2.6) et l’identification est obtenue à l’aide d’un catalogue analytique ou un
logiciel d’identification.
La première galerie API apparue dans le monde de la microbiologie a été la galerie
Api 20 E destinée à l'identification des entérobactéries dont les coliformes et salmonelles.
Différentes galeries API existent pour l’identification d’autres germes, à titre d’exemple :
API 20 STREP pour les streptocoques, API 20 STAPH pour les staphylocoques, API 20 A
pour les anaérobies dont. L’API 20 E peut être utilisée pour l’identification des nonentérobactéries (Vibrio, Pseudomonas).
La technique est la suivante : partir d'une boite de pétri contenant une culture pure (un seul
type de bactérie), une suspension dans de l'eau distillée stérile est préparée. Avec cette
solution bien homogénéisée, on remplit les galeries en respectant le mode d'emploi (voir
figure ci-après). Les galeries sont incubées à 37°C pendant 24 heures. Après incubation, la
lecture de la galerie doit se faire en se référant au tableau de lecture. Les tests sont regroupés
en groupe de 3, et une valeur (1, 2 ou4) est indiquée pour chacun. Additionner à l’intérieur de
chaque groupe les nombres correspondants aux tests positifs. On obtient un nombre de 7
chiffres qui sert de code d’identification. Se référer en suite au catalogue API pour Identifier
la souche d’après ce code.
Oxydase -
Oxydase +