Chapitre III : Applications des techniques de génétique
moléculaire dans l’identification des poissons
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Figure23 : Les courbes de fusion des produits de PCR dans des échantillons de poissons
individuels générés par le procédé SYBR Green PCR en temps réel(Bajzik,et al., 2012).
3.2. Méthode de PCR en temps réel TaqMan
Les amorces conçu et la sonde TaqMan sont spécifiques pour toutes les marqueurs
génétiques qui provient de -la région de control D- d'ADN mt, pour l'identification de la
carpe commune (Cyprinuscarpio) (Bajzik,et al., 2012).
Les paires d'amorces et la sonde TaqMan ont été préparées dans leur forme finale par
Roche, Slovaquie (Bajzik,et al., 2012).
Les séquences d'amorces et sondes TaqMan étaient comme suit :
D – Loop F (5´-CATCTGGTTCCTATTTCAGGGA-3´),
D – Loop R (5´-GGCACTATGTAAGGATAAGTTGAACT-3´),
TMLNA (LC640-TGCACTTGAGATAAAAGTATGTAA+T+T+CT-BBQ).
Programme d’amplification :
La pré-incubation de l'échantillon à 95 °C pendant 10 minutes. Il a été ultérieurement
réitéré par 45 cycles avec un profil de température :
La dénaturation à 95 °C pendant 10 s, hybridation à 63 °C pendant 30 s et extension pour
20 s à 72 °C, suivie par la mesure de la fluorescence. Le refroidissement final était à 30 s à
40°C.L'amplification PCR a été effectuée dans le cycleur capillaire 'LightCycler 1.5' à l'aide
delogicielLightCycler (version4.5) (Bajzik,et al., 2012).