Chapitre III : Applications des techniques de génétique
moléculaire dans l’identification des poissons
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La courbe de fusion des produits de PCR a été lancé par des échantillons de chauffage à 95 °C
et refroidissement immédiate à 65 °C pendant 15 secondes. L'échantillon a été chauffé à un
taux de 0,1 °C par seconde et la fluorescence a été mesurée après chaque changement de
température de un dixième de degrés (Bajzik,et al., 2012).
L'amplification PCR a été effectuée dans le cycleur capillaire 'LightCycler à l'aide de
logiciel LightCycler 1,5' (version 4.5) (Bajzik,et al., 2012).
Les résultats de l'utilisation de la méthode optimisé le PCR en temps réel SYBR Green
pour l'identification des espèces de carpes communes (C. carpio) prouver sa pertinence. Et
permet la création d'une courbe de fluorescence linéaires avec ses phases exponentielles dans
le contrôle positif (échantillon "16" - C. carpio) seulement. Dans d'autres échantillons de
poissons une augmentation minime de la fluorescence a été détectée (Bajzik,et al., 2012).
Figure22 : Les courbes de la fluorescence au cours de l'amplification par PCR pour des
échantillons de poissons individuels en utilisant la méthode SYBR green PCR en temps réel.
(Bajzik,et al., 2012).
L’analyse de la courbe standard qui représente le contrôle positif PCR (C. carpio),
contenant le pic de fusion caractéristique (jusqu'au point de fusion 80,72 ° C). Montre un seul
pic indique un seul produit (C. carpio) qui peut être vérifié lors de la caractérisation du
produit de PCR par électrophorèse sur gel d'agarose (Bajzik,et al., 2012).