Chapitre III : Applications des techniques de génétique
moléculaire dans l’identification des poissons
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L’auxide et la thonine ne présentent pas d'amplicons. En vue de la confirmation de la
substitution de produit et de fraude, il serait intéressant de mettre en évidence des gènes
spécifiques à la thonine et à l'auxide(Bendadech, 2012).
3. Application PCR en temps réel :
La PCR en temps réel, à cause de sa capacité à produire des résultats rapides, spécifiques
et quantitatifs a été utilisé pour l’identification des espèces de la carpe commun
(Cyprinuscarpio) parmi 15 différentes espèces de poisson d'eau douce (Bajzik, et al., 2012).
On utilisant un marqueur prédéfini de la carpe commune (Cyprinuscarpio), qui provient
de l’ADNmt-la région de control D.
Ensuite 15 ADNmt présente dans l’ADN d’isolats de 15 sortes de poissons d’eau douce ont
été analysé et comapré avec les marqueurs de la carpe commune à l'aide de deux méthodes
d'identification par PCR(Bajzik,et al., 2012).
Méthode de PCR en temps réel TaqManet la méthode PCR en temps réel SYBR Green.
3.1. la méthode PCR en temps réel SYBR Green.
Le marqueur spécifique pour l'identification des espèces de la carpe commune
(Cyprinuscarpio) a été amplifié à l'aide d'amorces suivantes :
Carp1-F (5´-TGGCATCTGGTTCCTATTTCA-3´),
Carp1-R (5´-CCAAAGGGGGCACTATGTAA-3´), ……Conçu par Židek et Golian, 2008.
Le programme d’amplification a été comme suite :
La pré-incubation des échantillons à 95 °C pendant 2 minutes. Il a été ultérieurement répété
par 50 cycles avec un profil de température :
dénaturation à 95 °C pendant 45 s , hybridation à 60 °C pendant 45 s et d'extension à 72 °C
pendant 1 min 20 s avec une dernière prorogation pour 10 min à 72 °C (Bajzik, et al., 2012).