Chapitre III : Applications des techniques de génétique
moléculaire dans l’identification des poissons
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2. Application de la techniques PCR :
Une étude portée sur l’identification d’espèces de thon rouge par la mise en évidence du
fragment du gène mitochondrial (cytochrome b de 146pb ) spécifiques thon rouge
(Thunnusthynnus.) . Effectuée par Bendadech, en 2012. a nécessité l’utilisation d’amorces
spécifiques (cb 146L/cb146H)décrites par Lin et Hwang (2007), dont les séquences sont les
suivantes :
Cb146L (5’-CCTCGCAATACACTATACCCC-3’)
Cb146H (5’-CGATGTGGAAGTAGATGCAG-3’)
Et d’un programme d’amplification spécifique
Programme d’amplification :
Une étape de dénaturation à 95°C pendant 10 minutes, suivie par 30 cycles consistant
chacun à 1 minute à 95°C et 1minute à 72°C. L’étape d’extensionfinal est étendue à
10minutes.
Toutes les réactions de PCR sont réalisé dans un volume total de 25 µl, contenant 0.5µg de
l’ADN total, 5 µM de chaque amorce, 200 µM de dNTP et 2.5 U de pro taq ADN polymérase
(Biolabs) , dans du tampon de PCR mix prêt à l’emploi (Biolabs) , et une eau distillée stérile
qsp 25 µl (Lin, et al.,2007)Les amplifications par PCR sont effectuées dans un termocycleur (
MastercyclerPersonal, Eppendorf). Les produits d’amplification sont ensuite maintenus à 4°C
(Bendadech, 2012).
Tous les échantillons d’ADN extraits ont été étudies par PCR .
Les amplicons obtenus ont été mis en évidence par électrophorèse sur gel d’agarose à 2% en
présence de marqueurs de taille (fig22) (Bendadech, 2012).