Chapitre II : Méthode d’identification
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un ddNTP. Dans le premier cas, la synthèse continue tandis que dans le second, la synthèse
s’achève en cette position (Khazaal, et al., 2005).
L’effet global est que dans chacune des quatre préparations, est produite une série de
molécules de l’ADN de différentes longueurs qui se terminent en une position où dans la
matrice est présenté la base complémentaire de celle dont la forme dd est présenté dans le
milieu réactionnel considéré. Par exemple, dans la préparation contenant du ddATP, est
produite une série de molécules d’ADN qui se terminent toutes par un A correspondant à un T
dans la matrice (Khazaal, et al.,2005).
A l’issue de la réaction de séquençage, les molécules d’ADN synthétisées sont
séparées suivant leurs tailles par électrophorèse sur gel de polyacrylamide avec les 4
préparations versées sur 4 lignes parallèles du gel. Si on ajoute des dNTP contenant du
phosphore ou du souffre radioactif dans les préparations de séquençage, les ADN synthétisés
deviennent radioactifs, ce qui permet de les détecter en plaçant le gel de polyacrylamide
contre une feuille de film sensible aux rayons X. Ceci s’appelle de l’autoradiographie.
C’est plutôt dans le cas de southern blot Lorsqu’on développe le film, on peut observer une
série de bandes dans chacune des lignes de gel. La séquence de l’ADN matrice peut alors être
déterminée en identifiant les plus petites bandes et les bandes de plus en plus grosses et en
associant la ligne dans le gel à la base terminale (Khazaal, et al., 2005).
Figure 18 : Séquençage de l’ADN(Khazaal, et al., 2005).