Chapitre II : Méthode d’identification
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L’utilisation d'un ddNTP permet d'obtenir un ensemble de fragments d'ADN de
différentes tailles correspondant à l’emplacement d'un nucléotide donné.
Il ne reste plus qu'à "lire" la séquence: on fait migrer tous ces fragments sur un gel afin
de les séparer selon leur taille. Au niveau d'une "ligne" du gel correspond une taille (précise
au nucléotide près) du fragment d'ADN. Afin de lire les quatre nucléotides de l'ADN, on fait
migrer séparément les fragments issus des quatre mélanges réactionnels (à ddATP, à ddCTP,
à ddGTP et à ddTTP) (figure18).
Figure 19 : Le gel de migration est composé de 4 pistes, chacune d’elles est attribuée à la
lecture d’un nucléotide: A: adénine; T: thymine; G: guanine; C: cytosine.
(Khazaal, et al., 2005).
La lecture s’effectue horizontalement de bas en haut en notant chacune des bandes
On commence la lecture depuis la bande la plus rapide (en bas) jusqu'à celle la plus retardée
(en haut), on a obtenu la séquence (TCAAATGGCCAGCAGG), alors la séquence recherchée
est celle qui en est complémentaire et lue dans le sens inverse donc c’est:…
(AGTTTACCGGTCGTCC) (figure 19)(Khazaal, et al., 2005).