Chapitre II : Méthode d’identification
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Un laser va lire les allèles présents dans l’ADN amplifié. Les résultats sont exprimés,
pour chaque fragment analysé, par deux chiffres qui mesurent la longueur de ces
fragments (l'un est hérité du père, l'autre de la mère de l’individu).
Le profil de migration obtenu est appelé «empreinte génétique»(Khazaal,et al.,
2005).
2. 2.6 RFLP (Le polymorphisme de longueurs des fragments de restriction)
L’analyse RFLP (Restriction fragment LengthPolymorphism ) est une des toutes
premières techniques d’analyse ADN.
Apres extraction, l'ADN est soumis a une ou plusieurs enzymes de restriction qui
coupent la molécule a des endroits précis, définis par une séquence de bases, appelé sites de
restriction. Toute modification par mutation dans la séquence du site de restriction empêche
l'action de l'enzyme. Cette non-coupure de l'ADN est détectée par une variation du nombre et
de la longueur des fragments d'ADN (fragments de restriction) obtenus après digestion
enzymatique, puis séparation par électrophorèse et visualisation par hybridation avec une
sonde radioactive ou fluorescente (Hubert, 2007). Ce type de marqueur est codominant si le
nombre d'enzymes utilisées est faible et s'il y a peu de sites d'hybridation de la sonde dans le
génome. En faisant agir simultanément plusieurs enzymes de restriction, on étudie le
polymorphisme a autant de sites particuliers qui se répètent tout au long de la molécule
d'ADN (Hubert, 2007).
Figure 12 : Principe de la RFLP (Hubert, 2007).
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Un laser va lire les allèles présents dans l’ADN amplifié. Les résultats sont exprimés,
pour chaque fragment analysé, par deux chiffres qui mesurent la longueur de ces
fragments (l'un est hérité du père, l'autre de la mère de l’individu).
Le profil de migration obtenu est appelé «empreinte génétique»(Khazaal,et al.,
2005).
2. 2.6 RFLP (Le polymorphisme de longueurs des fragments de restriction)
L’analyse RFLP (Restriction fragment LengthPolymorphism ) est une des toutes
premières techniques d’analyse ADN.
Apres extraction, l'ADN est soumis a une ou plusieurs enzymes de restriction qui
coupent la molécule a des endroits précis, définis par une séquence de bases, appelé sites de
restriction. Toute modification par mutation dans la séquence du site de restriction empêche
l'action de l'enzyme. Cette non-coupure de l'ADN est détectée par une variation du nombre et
de la longueur des fragments d'ADN (fragments de restriction) obtenus après digestion
enzymatique, puis séparation par électrophorèse et visualisation par hybridation avec une
sonde radioactive ou fluorescente (Hubert, 2007). Ce type de marqueur est codominant si le
nombre d'enzymes utilisées est faible et s'il y a peu de sites d'hybridation de la sonde dans le
génome. En faisant agir simultanément plusieurs enzymes de restriction, on étudie le
polymorphisme a autant de sites particuliers qui se répètent tout au long de la molécule
d'ADN (Hubert, 2007).
Figure 12 : Principe de la RFLP (Hubert, 2007).