Chapitre II : Méthode d’identification
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Limite :
Des fragments de tailles identiques peuvent être générés par des sites de restriction
différents. Profiles de bandes parfois très complexes à analyser.
La variation de ces fragments de restriction est souvent insuffisante au niveau populationnel
(deux états uniquement par site de restriction). La grande quantité d'ADN requise, le coût et la
difficulté d'emploi de sondes marquées, limitent l'utilisation de cette technique en biologie des
populations. L'amplification (PCR) préalable du fragment à analyser permet toute fois de
s'affranchir de l'étape d'hybridation (Hubert, 2007).
La technique PCR-RFLP :
L'utilisation de la PCR permet d'amplifier une région définie du génome puis
d'appliquer la technique RFLP au produit PCR(Hubert, 2007). Cette méthode appelée PCRRFLP présentent des avantages par rapport à la technique de RFLP simple : elle permet
d'obtenir facilement des marqueurs codominants et évité l'étape d'hybridation et l'utilisation de
sonde radioactive(Hubert, 2007). Et d’étudier des organismes pour les quels la quantité de
matériel biologique est faible, avec manips moins contraignantes (Arnaud, J F, 2006).
Le produit PCR digéré par une (ou plusieurs)enzymes de restriction est simplement mis à
migrer dans un gel d'agarose et le polymorphisme de la position et du nombre de bande est
visualise par une réaction colorée au Bromure d'ethydium(Hubert, 2007).